环境微生物监测标准操作规程
一、监测指征
1．感染暴发或感染流行时，环境因素在感染传播中有流行病学意义。

2．监测潜在的危险环境状况，证明有危险的病原体存在或证明危险的病原体已被成功清除。

3．当某项感染控制措施改变时，评估其效果；或者根据规范要求，仪器设备或系统启用时监测。

4．目标性监测的需要。

5．循证医学证据支持。

二、空气监测(沉降法)
(一)采样时间：消毒处理后与进行医疗活动之前。

(二)采样高度：距地面垂直高度80～150 cm。

(三)采样点设置
1．非洁净房间：室内面积≤30 ㎡，在对角线上设里、中、外3点。

里、外两点位置各距墙1 m；室内面积>30 ㎡，设东、西、南、北、中5点。

其中东、西、南、北4点均距墙1 m。

9 cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露5 min后送检培养。

2．洁净房间：清洁房间在空态或静态条件下，根据房间的不同清洁级别进行布点，操作按照GB 50333—2002。

9cm直径普通营养琼脂平板在采样点暴露30 min后送检培养。

(四)采样注意事项
1．采样人员做好手部卫生，佩戴口罩、帽子等个人防护装备。

进入清洁房间采样须穿洁服。

2．皿盖打开顺序应先内后外；手臂及头不可越过培养皿上方；行走及放置动作要轻，尽量减少对空气流动状态的影响；皿盖应扣放，以防污染。

3．采样结束后，由外向内合上皿盖。

4．采样完毕的培养皿应在6 h内培养。

(五)实验室检验
1．培养皿在37℃培养48 h后，进行菌落计数和致病菌检验。

普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T 4789．28—2003；菌落计数方法按照GB\T 7918．2—1987；致病菌检验：溶血性链球菌检验按照GB／T 4789．11—2003，沙门菌检验按照CB\T 4789．4—2003，铜绿假单胞菌检验按照GB／T7918．4—1987，金黄色葡萄球菌检验按照CB\T 7918．5—1987,，
2．计算结果：非洁净房间以100 c㎡的平皿在空气中暴露5 min即相当于10 L 空气中的细菌数，计算公式为：
细菌数(cfu／m3)=1 000÷(A／100×t×10／5)×N=50 000N／At
式中：t——平皿暴露于空气中的时间(min)；N—一培养后平皿上的菌落数(cfu／平皿)；A——所用平皿的面积(c㎡)。

洁净房间直接以“个／(30 min·Φ90)”平皿为单位计算结果。

(六)结果判断：
参照GB 15982—1995《医院消毒卫生标准》。

三、物体表面监测
(一)采样时间：
消毒处理后4 h内。

(二)采样方法
被采样本面积<100 c㎡取全部表面；如采样面积≥100 c㎡，连续采样4个位置(不可有重叠)，每个位置采5 cm×5 cm的大小，用浸有无菌生理盐水的棉拭子1支，在规格板内横竖往返均匀涂擦各5次，并随之转动棉拭子，剪去手接触部位后，将棉拭子投入10 ml无菌生理盐水试管内。

不规则的物体表面，用棉拭子直接涂擦，采样面积≥30 c㎡
(三)采样注意事项
1．送检时间不得超过6 h，若样品保存于4℃，则不得超过24 h。

2．消毒后采样一定要采用中和剂，不同消毒剂所用中和剂不同，可参考2002版《消毒技术规范》。

(四)实验室检验
1．取1 m1倾注培养，平行双份。

37℃培养48 h，进行菌落计数和致病菌检验。

普通营养琼脂培养基的配制按照GB／T 4789．28—2003；菌落计数方法按照(3B／T 7918．2—1987；致病菌检验与空气监测相同。

2．计算公式：细菌总数(cfu／c㎡)=(平板菌落数×稀释倍数)／采样面积(c㎡。

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(五)结果判断：参照GB 15982—1995《医院消毒卫生标准》。

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