为避免操作误差，等容量稀释的传统方法 常用1︰K系列稀释法（K=各组剂量比值）。
根据实验设计要求确定最高剂量组所需受 试化学物的浓度和总体积，配制母液。
（3）等容量稀释法配制6个剂量组的染毒溶液
➢ 求母液浓度C1 绝对致死剂量为2500mg/kg，最低中毒剂
量为800mg/kg，每10g体重小鼠灌胃0.2mL C1=2500mg/kg×10g/0.2mL＝125mg/mL ➢ 求公比r
三、实验试剂和材料
1. 药物与试剂 盐酸二甲硝咪唑、苦味酸酒精 饱和溶液和中性红溶液、记号笔
2. 设备与器械 吸管、烧杯、灌胃器、电子天 平（感量0.1 g）、外科手术剪、5 mL注射器、 10 mL注射器、干棉球 3. 实验动物 成年健康小鼠，18-22g，雌雄 各半
四、实验步骤
1. 剂量选择： 查阅文献，估计预期毒性中值；
式中，K：各组剂量的比值，K＝1/r。 取母液m mL置一容器中，供最高剂量组染毒用；加入
m mL溶剂，稀释后的浓度为C2，C1︰C2＝1︰K，取出 m mL供第二组动物染毒用；再加入m mL溶剂，稀释后的 浓度为C3，C2︰C3＝1︰K，取出m mL供第三组动物染 毒用。依次类推，配制其它不同剂量组的试液。
可能的中毒表现： 兴奋，活动增加、骚动、窜跑、跳跃、呼吸加深加快； 抑制，活动减少、呆立、静卧、步态不稳、呼吸困难等； 刺激症状：搔鼻、尖叫、出汗、流涎、眼耳鼻等的出血。
观察指标（2）
体重 观察期间的体重变化可以反映动物中毒
后的整体变化，应3-5天测量一次； 体重减轻：可能是动物食欲下降、摄食
量减少；也可能是化合物干扰代谢系统，影 响食物吸收、利用；
（1） 动物的禁食和复食：灌胃前禁食6～10h，使 动物保持空腹状态，且不至因禁食时间过长影响肝 脏，进而影响实验结果。灌胃后至少2～3h后才能 复食，灌服油剂比水剂要求复食时间更长； （2） 灌胃体积：小鼠每10g体重灌胃0.1～0.2mL， 最多不超过0.4mL。小鼠灌胃量的极限是0.5～1mL； （3） 灌胃方法和注意事项。
实验一 小鼠经口急源化学物急性毒性试验的 设计原则，了解实验基本程序；
2. 掌握小鼠经口灌胃技术； 3. 掌握计算LD50的方法。
二、急性毒性试验原理
动物一次或24 h内多次接触外源化学 物后，观察急性毒性反应及其程度，中 毒死亡的原因及特征，了解受试动物毒 性反应的剂量－反应关系，求出LD50。
小鼠经口灌胃给药方法
➢ 保定动物：用右手将小鼠尾巴提起，置于 鼠笼或粗糙的平面上，当小鼠向前挣扎时， 用左手的拇指和食指捏住小鼠两耳后颈背 皮肤，翻转小鼠置于掌心，拉直后肢，以 小指压住小鼠尾巴即可。
▪ 在保定小鼠过程中，不要用力过大，勿握 其颈部，以免窒息死亡。
小鼠的捉拿、固定
小鼠的捉拿法
小鼠经口灌胃给药方法
（2） 配制方法的选择：等浓度稀释法和等 容量稀释法。
等浓度稀释法：将受试化学物配制成一 种浓度，不同剂量组实验动物单位体重所给 受试化学物的体积不同，剂量越高，所用的 体积越大；剂量越低，所用的体积越小。
等容量稀释法
将受试化学物配制成不同浓度，不同剂量 组实验动物单位体重所给受试化学物的体 积相同，剂量越大，受试化学物配制的浓 度越高。
➢ 给药：
以灌胃器轻轻压其头部，
使口腔与食道成一条直线;
再将灌胃针沿上腭壁轻轻
进入食道; 当灌胃针进入约3cm左右 时即达胃内。
小鼠灌胃法
灌胃时的注意事项
▪ 如果灌胃针的位置插入正确，小鼠可自行 吞服药；
▪ 灌胃针插入位置不正确，小鼠会强烈挣扎， 必须拔出重插，否则可能将药物灌入气管， 造成小鼠死亡；
预试验，求出受试化学物的0～100%或 10～90%大致致死范围，设计正式试验的剂 量和分组。
盐酸二甲硝咪唑绝对致死剂量2500mg/kg， 最低中毒剂量为800mg/kg
2. 实验动物的标记和分组 染色法，苦味酸酒精饱和溶液和中性红溶液
分组，采用随机法
3. 受试物的配制
（1） 溶剂的选择：选择原则是不与受试物 反应，最常用的溶剂为水。助悬剂：淀粉液、 明胶液等；助溶剂：吐温80、吐温60、聚乙 二醇等。
体重增加：低水平的化学毒物促进动物 生长，动物体重增长率大于对照组。
观察指标（3）
死亡数和死亡时间 十分重要的中毒机理研究信息；重
点观察和记录各个剂量组动物的死亡数； 每只动物死亡的时间（尤其是最早出现 死亡的时间）。
▪ 注完药液后轻轻抽出灌胃针； ▪ 小鼠一次最大灌胃量为：0.4ml/10g.bw。
注意事项
▪ 保定时：一定要固定好动物，使动物头不 要随意摆动，但不能挤捏颈部。
▪ 灌胃器针头弧度面向前从动物右嘴角处插 入，灌胃动作要轻柔。不能虐待动物，尤 其是大鼠，否则，容易被其咬伤。
▪ 插入灌胃针时，如果遇到阻力，不能用力 继续进针，应停止进针，等待其自动吞咽 时，迅速进针。否则，容易损伤动物食道。
5. 中毒症状观察和结果记录
▪ 染毒后认真观察中毒发生、发展过程，中 毒反应的特点和毒作用靶器官。
▪ 准确结果：观察24 h。
观察指标（1）
中毒症状
对于了解受试化学物的急性毒性特征及该化合物毒性作 用的靶器官非常重要；
临床中毒反应和死亡时间可为中毒机制提供线索； 神经毒性：染毒后立即惊厥、共济失调等； 迟发性死亡：化合物有肝、肾毒性； 植物神经兴奋：腹泻、竖毛等；
➢ 药物溶液的配制 ✓ 称取盐酸二甲硝咪唑6.25g，用生理盐水或
蒸馏水将药物溶解并稀释至50mL，即为 母液(母液浓度为125mg/mL)； ✓ 从母液中取10mL供第1组动物染毒； ✓ 在剩下的母液中加入10mL溶剂，稀释后 取10mL供第2组染毒； ✓依次类推，配制其它不同剂量组的试液。
4. 灌胃给药
√ r=
n-1
b a
=
√6-1 2500 800
r一般为1.2-1.5 n为组数
=1.25
➢ 求母液应配制的总量
设：母液浓度为C1，各组所需要的量为m mL， 母液应配制的总量M为：
各组剂量比值K＝1/r＝0.8 母液总量：M＝m/(1-K)＝ 10/(1-0.8)=50mL 受试化学物的质量为： 125mg/mL×50mL＝6.25g