（请教）石蜡切片时碎片的缘故！vetsyl发贴:67 积分: 1状态:离线2005-04-28 17:08石蜡切片时怎么老是碎片和片堆积到一起，褶皱很大啊vetsyl发贴:67 积分: 1状态:离线2005-04-28 17:10请各位专家给出宝贵的建议！谢谢bluelove用心做好每件事发贴:164积分:33状态:隐身2005-04-28 19:28组织切下来之后要先放到水浴锅里，温度一般是40度左右，待组织完全展开之后再捞片，就不会皱了！碎片的原因有很多，有可能是你的组织处理(脱水问题）的问题，也有可能是切片时蜡块没有修齐，要找到原因再对症处理了！vetsyl发贴:67 积分: 1状态:离线2005-04-29 15:58这边展片不是在水浴锅里，是放在载玻片上，然后放到一个加热的板上。
但是问题是切片时那些薄片松散的很厉害，像一包渣样，假如有浴锅可能都放不进去呀，不知道是刀片的问题，还是脱水的问题，还是修切的问题？bluelove2005-04-29 19:53用心做好每件事发贴:164积分:33状态:隐身我个人认为组织放到载玻片上之后就沾上去了展片效果不好,还是在水浴锅里等组织完全展开之后再捞片效果好一些!你的切片是什么地方烂?如果是组织烂就可能是组织处理的问题,如果石蜡部分都是烂的,恐怕就是你修切的问题了吧!野原诺言来之不易丁香园版主发贴:3774 积分:404状态:隐身2005-04-30 08:12vetsyl wrote:这边展片不是在水浴锅里，是放在载玻片上，然后放到一个加热的板上。
但是问题是切片时那些薄片松散的很厉害，像一包渣样，假如有浴锅可能都放不进去呀，不知道是刀片的问题，还是脱水的问题，还是修切的问题？1.切片时用一块冰在石蜡切面上冷冻一下蜡块再切。
2.使用的蜡太软，换用硬一些的蜡再次浸蜡包埋。
3.换用新刀片，找高手切。
4.标本处理有问题，在纯酒精中时间太久导致组织脱水严重从而质地变硬变脆。
GOOD LUCK!bluelove用心做好每件事发贴:164积分:33状态:隐身2005-04-30 13:07野原wrote:1.切片时用一块冰在石蜡切面上冷冻一下蜡块再切。
2.使用的蜡太软，换用硬一些的蜡再次浸蜡包埋。
3.换用新刀片，找高手切。
4.标本处理有问题，在纯酒精中时间太久导致组织脱水严重从而质地变硬变脆。
GOOD LUCK!我们切之前蜡块和刀都要放到冰箱里冷冻，切时一个一个拿；切的过程中要用两把刀轮换放到冰箱里降温，刀不能热了！vetsyl发贴:67 积分: 1状态:离线2005-04-30 19:04谢谢各位专家提供的宝贵经验，我试试看！hukaimeng发贴: 4积分:0状态:离线2005-05-07 20:23固定液浓度试着调低一点，固定完以后用水冲洗时间长一点2000shanda发贴:22积分: 6状态:离线2005-05-08 15:20石蜡切片时怎么老是碎片和片堆积到一起，褶皱很大啊我认为:你石蜡切片老师碎片,主要是因为固定,包埋过程处理不当所致.切后,褶皱多,你必须放到一水浴锅里,没有水浴锅,你可拿个小瓷盆,到些热水,使水温度基本是40度左右.利用张力,使切片平展.【求助】大鼠脑组织如何制备石蜡切片davidmarw ill发贴:10积分:02005-09-22 16:24请问大鼠脑组织如何制备石蜡切片?请大家指导!fxd edited on 2005-09-23 19:44状态:离线jhzhou发贴:118 积分:15 状态:离线2005-09-22 23:01脑组织较软，在组织包埋过程中脱水、透明时间较难掌握。
建议脱水时在95％酒精两次各十五分钟和100％酒精三次各十分钟，透明则是在二甲苯中三次各十分钟，具体根据组织大小厚度再稍微调整。
小小冰发贴:311 积分:14 状态:离线2005-09-26 11:09因为脑组织含水量大,在组织脱水时应从低浓度的酒精开始脱水,效果好,建议60%,65%.70%,75%,80%,85%,90%,95%,100%,每级15分钟,二甲苯两级每级15分钟,浸蜡20分钟温度65度即可.取材时大约0.2-0.4厘米,效果很好,试试吧!gaofeilab丁香园不准中级战友发贴:177积分:20状态:离线2005-09-26 21:58组织较大，且少腔隙，应延长每步时间，具体为固定过夜（固定数小时后应切开，保证浸透）后，水-50%-70%-80%-90%各30min，100% 30mi n * 两次，酒精100%：二甲苯=1：1 过渡30min，二甲苯30min*2，二甲苯：石蜡=1：1 30min，石蜡1h*2次。
石蜡切片制备基本步骤一、准备工作（一）（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷2、将器皿在自来水下冲洗干净3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。
（二）配制：硫酸洗液的配制清洁液（洗液）的配制：成分强酸液次强酸液弱酸液浓硫酸（ml）1000 200 100重铬酸钾（mg）63 120 100蒸馏水（ml）200 200 1000重铬酸钾1200g蒸馏水2000ml将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌（三）载玻片与盖玻片的处理1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时2.流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。
二、准备工作（二）常用液体的配制（一）缓冲溶液：1．磷酸盐缓冲液A液：0.1mol/L磷酸二氢钠B液：0.1mol/L磷酸氢二钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）2．枸椽酸缓冲溶液A液：0.1mol/L枸椽酸B液：0.1mol/L枸椽酸钠A液与B液按比例混合调整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）（二）固定剂：1．甲醛：10%甲醛福尔马林 100ml蒸馏水900ml注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。
2．10％中性福尔马林钙固定液甲醛液10ml蒸馏水90ml加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。
3．4%多聚甲醛：8%多聚甲醛多聚甲醛8g蒸馏水100ml加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。
滴加1N NaOH，并不停搅动至液体清明。
1N NaOHlN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量氧化钠(NaOH )；分子量＝40．005，当量价＝11N Na0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。
取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中4%多聚甲醛8%多聚甲醛50ml0.1M磷酸盐缓冲液50mlPH7.2先取50 ml 8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值调至7.2 4．Bouin液：苦味酸饱和水溶液75ml36％~40％福尔马林液25ml冰醋酸5m15．改良Bouin氏固定液苦味酸饱和水溶液45ml95%酒精45ml36％~40％福尔马林液5ml冰醋酸5m16．Carnoy液：冰醋酸10 m1氯仿30 m1无水乙醇60 m1以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。
24小时后固定液失效。
（三）染色液1．Harris苏木精液A液：苏木精1g无水酒精10mlB液：铵矾或钾矾20g蒸馏水200ml氧化汞0.5ml冰醋酸8ml将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。
全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96 ml中加4 ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。
此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱落细胞的核染色。
由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。
2．Mayer苏木精掖苏木精1g钾矾或铵矾50g碘酸钠0.2g蒸馏水1000ml水合氯醛50g枸橼酸1g将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。
再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮沸5分钟，冷后过滤备用。
如不急用可不煮沸而在室温待其成熟，染液可较长期贮存使用。
核染色鲜明，染色时间5—10分钟。
用该染液染色后，不需分化，充分水洗蓝化后即可，伊红复染细胞质，使用一段时间后就要换新溶液。
3．Hasnsen甲矾苏木精的配制A液：苏木精1g无水乙醇10mlB液：钾矾20g蒸馏水200mlC液：高锰酸钾1g蒸馏水16ml三液分别溶化后，将A液倒入B液，再加入C液3ml，充分搅拌均匀后加热至沸腾，1分钟左右，将容器置于冷水中使其迅速冷却，此液配后即可使用，染后无需碱化，细胞核即为蓝色，效果较好，高锰酸钾可以迅速氧化苏木精（每1g苏木精需0.177g高锰酸钾氧化）。
4．伊红0.5~1%水溶液或酒精溶液。
1．水溶性伊红伊红5~10g蒸馏水1000ml冰醋酸10滴先将水溶性伊红加入蒸馏水中，用玻璃棒搅起泡沫后过滤，再加冰醋酸。
2．醇溶性伊红伊红5~10g70%~90%酒精1000ml冰醋酸10滴（四）其它1．麻醉剂：2~4%戊巴比妥钠，1ml/kg体重（45mg/kg）。
2．各级浓度酒精的配制75%；85%；95%；100%酒精。
75%和85%酒精用95%酒精配制；（取75ml95%酒精，加水至95ml，即为75%酒精）3．盐酸洒精多用于多种染色过程中的分色，如苏木精染色后分色。
配法是在100ml的70％酒精内加0.5~1ml的浓盐酸(Hcl)。
用盐酸酒精分色后要经自来水充分冲洗组织切片，去除所含的酸再作其他处理。
4．碘酒取碘5g，溶于95％酒精80ml，再加入20ml蒸溜水即成5．生理盐水以氯化纳0.85~0.90g溶于100m1蒸馏水配成的生理盐水适用哺乳动物三、取材，固定（一）实验动物的抓取及固定1．小白鼠、大白鼠的抓取及固定方法要点：（1）动作要轻缓；（2）不要突然袭击；（3）如发现动物的毛发竖起来时，最好停一会后再抓；（4）将四肢打开，固定在木板或方形蜡板上。
2．实验家兔的抓取及固定方法要点：（1）随时抚摩其头部；（2）防止被其脚爪抓伤；（3）根据实验要求选择固定方法。
3．豚鼠的抓取及固定方法要点：先用一只手扣住豚鼠背部，然后抓紧两耳间头颈部的皮肤，用另一只手托起臀部送到动物固定台上。