农杆菌介导的转化所用基本培养基配方
一、NB培养基配方(基本培养基)
N6大量:(mg/l)母液:10X,1L(mg)
硝酸钾KNO3
硫酸氨(NH4)2SO4 磷酸二氢钾KH2PO4 硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钙CaCl2·2H2O 2830
463
400
185
166
28300
4630
4000
1850
1660
B5微量:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
硼酸H3BO4
硫酸锰MnSO4·H2O
硫酸锌ZnSO4·7H2O 碘化钾KI
钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 3
7.58
2
0.75
0.25
0.025
0.025
300
758
200
75
25
2.5
2.5
铁盐:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
硫酸亚铁FeSO4·7H2O
乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.8
37.3
2780
3730
肌醇:(mg/l)母液:100X,1L(mg)肌醇Myo-inositol 100 10000
有机成分:(mg/l)母液:50X,1L(mg)
盐酸硫胺素ThiamineHCl
盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin
水解酪蛋白Casamino acids 谷氨酰胺Glutam
脯氨酸Proline ine
甘氨酸Glycine 10
1
1
300
250
500
2
500
50
50
15000
12500
25000
100
蔗糖Sucrose 30000mg/l
琼脂Phytagel 2400mg/l
pH 5.8-5.9
注意:有机成分不能高压灭菌,须用滤器抽滤,分装后-20℃保存
二、AAM培养基配方
大量:(mg/l)母液:10X,1L(mg)
磷酸二氢钾KH2PO4 硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钾KCl
氯化钙CaCl2·2H2O 170
370
2940
440
1700
3700
29400
4400
微量:(mg/l)母液:100X,100ml(mg)
硫酸锰MnSO4·H2O
钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硼酸H3BO4
硫酸锌ZnSO4·7H2O 碘化钾KI
硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 7.58
0.25
3
2
0.75
0.0387
0.025
758
25
300
200
75
3.87
2.5
铁盐:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
硫酸亚铁FeSO4·7H2O
乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.8
37.3
2780
3730
肌醇:(mg/l)母液:100X,1L(mg)肌醇Myo-inositol 100 10000
维生素:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
盐酸硫胺素ThiamineHCl 盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin 0.5
0.5
0.5
50
50
50
氨基酸:(mg/l)
甘氨酸Glycine
精氨酸Arginine
谷氨酰胺Glutamine 7.5 174 876
水解酪蛋白Casamino acids 500mg/l
乙酰丁香酮Acetosgringone 100μΜ
葡萄糖Glucose 68500mg/l
蔗糖Sucrose 30000mg/l
pH 5.2
注意:AAM培养基不能高压灭菌,须用滤器抽滤,分装后-20℃保存
三、YEB固体培养基
(pH 7.0)
酵母提取物
蛋白胨
牛肉膏
蔗糖
硫酸镁
添加: Kan 50 mg/L Rif 50 mg/L 1.0g/L5.0g/L5.0g/L5.0g/L0.5g/L
四、LB固体培养基(pH 7.0-7.2)
酵母提取物
蛋白胨
NaCl
添加: Kan 50 mg/L Rif 50 mg/L 5g/L10g/L10g/L
五、MS培养基配方
大量:(mg/l)母液:20X,1L(mg)
硝酸铵NH4NO3
硝酸钾KNO3
磷酸二氢钾KH2PO4硫酸镁MgSO4·7H2O 氯化钙CaCl2·2H2O 1650
1900
170
370
440
33000
38000
3400
7400
8800
微量:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
硫酸锰MnSO4·4H2O 硫酸锌ZnSO4·7H2O 硼酸H3BO4
碘化钾KI
钼酸钠Na2MoO4·2H2O 硫酸铜CuSO4·5H2O 氯化钴CoCl2·6H2O 22.3
8.6
6.2
0.83
0.25
0.025
0.025
2230
860
620
83
25
2.5
2.5
铁盐:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
硫酸亚铁FeSO4·7H2O
乙二胺四乙酸二钠Na2EDTA 27.85
37.25
2785
3725
肌醇:(mg/l)母液:100X,1L(mg)肌醇Myo-inositol 100 10000
维生素:(mg/l)母液:100X,1L(mg)
盐酸硫胺素ThiamineHCl 盐酸吡哆醇PyridoxineHCl 尼克酸Niacin 0.4
0.5
0.5
40
50
50
甘氨酸Glycine 琼脂Phytagel 蔗糖Sucrose pH 5.8-5.9 2 mg/l 8000 mg/l 30000mg/l。