16
多样性分析
样本采集 分离纯化
形态察
菌种鉴定
系统发育 多相分类学鉴定
菌种保藏
代谢产物分析
斜面保藏 甘油保藏 冷冻干燥保藏
17
形态、大小、染色、运动性、鞭毛和荚膜
表达 特征
生理生化(API 50CH) 酶学(API ZYM)
表型
脂肪酸
化学
多
分类
醌
相
分
部分
类
基因组
16S rDNA序列同源比对
学
鉴
2
• 1 研究背景、目的及意义
3
1.1 研究背景
4
5
全世界胡杨林分布图
50 3 0
6
7
8
1.2 研究目的：
• 1 ) 对胡杨内生细菌进行筛选、纯化，用现代分子 生物学方法进行分子鉴定，阐明胡杨内生细菌的 多样性分布和种群结构。
• 2 ) 进行16S rDNA鉴定和构建进化树来确定它们 之间的亲缘关系，可以得知在塔里木河中游胡杨 内生细菌多样性。
19
2.4 特色与创新
特色
本研究选取的样点是世界保存较完整、较偏僻、 未受人类活动污染的自然胡杨林保护区。 首次对具有耐盐碱、耐热、耐旱、耐寒、耐贫瘠 特性的胡杨树中抽出茎杆液进行内生细菌的多样 性分析。
20
• 创新
• 1）首次对胡杨茎杆内生细菌进行研究，初步阐明 胡杨内生细菌的多样性和种群结构。
• [8]Bowen, G.D., Rovira, A.D., 1991. In: Waisel, Y., Eschel, A., Kafkafi, U. (Eds.), Plant Roots: The Hidden Half. Marcel Dekker, New York, pp. 349–388.
13
2019/9/16
14
2 . 研究内容、技术路线及可行 性
15
• 2.1 研究内容
从塔里木河中游胡杨林区废弃的Vgan河和Kiyik古 河道两岸的原始胡杨作为采样目标，抽出胡杨茎秆液， 然后用三种培养基（TSA,LB,NA）进行细菌的分离、 纯化和鉴定，分析在盐含量高、干旱的土壤环境中胡 杨内生细菌种类的多样性，对潜在的新种进行多相分 类学鉴定。
• 3 ) 对潜在新种进行多相分类学鉴定，确定其进化 地位。
9
采样地点
· 尉犁
卡尔曲尕
Vgan河 Kiyik河
10
采样地点
11
12
1.3 研究意义
• 1）首次探讨胡杨茎杆液内生细菌的种群结构和分 布状况。
• 2）阐述干旱、地下水面比较低的环境下胡杨树内 生细菌种类的多样性。
• 3）研究具有潜在应用价值的菌株及其特色产物。 • 4）进一步探索胡杨内生细菌的抗菌和抗虫机制。
遗传型
定
全基
DNA相似性（杂交）
因组
G+C （摩尔百分含量）
系统发育 16S rDNA序列进化分析确定进化地位
18
2.3 可行性分析
1）本研究采用的实验方法和技术路线都是非常 成熟的。 2）我们实验室可以提供完成本研究的相关条件。 3）本人在微生物学和分子生物学理论方面知识扎 实，查阅了大量的文献，在导师、师兄和师姐的 指导下，积累了丰富的实验经验。这为我实验的 顺利进行奠定了理论和实践基础。
• [9] Chaintreuil, C., Giraud, E., Prin, Y., Lorquin, J., Baˆ, A., Gillis, M., de Lajudie, P., Dreyfus,B., 2000. Photosynthetic Bradyrhizobia are natural entophytes of the African wild rice Oryza breviligulata. Appl. Environ. Microbiol. 66, 5437–5447.
• 2）对分析胡杨内生菌的多样性提供新的数据。 • 3）对特色菌株进行精确的分类学鉴定。
21
3. 预期结果
• 1)初步鉴定塔河中游胡杨内生细菌的生态分布及 优势种。
• 2)期待发现1-2株新种或新纪录种。 • 3)向GenBank注册细菌16SrDNA序列≥30个。 • 4)拟发表文章1-2篇。
22
4. 实验计划
• 2009年4月-2009年5月 采样 • 2009年5月-2009年6月 查阅文献 • 2009年6月-2010年1月 分离纯化与保种 • 2010年1月-2010年5月 分子鉴定 • 2010年5月-2010年6月 多样性分析 • 2010年6月-2010年9月 拮抗菌株的筛选 • 2010年9月-2011年2月 特色产物分析 • 2011年2月-2011年5月 实验结果分析及数据处理，撰写
潜在应用价值. 中国药学杂志, 2001,36(1): 14−15 . [5] 杨瑞先,陈立军,等.油菜内生细菌种群多样性分析.西北农林科技大 学学报(自然科学版),2005:33 . • [6]乔海莉; 田呈明; 骆有庆; 冯晓峰; 孙建华; 赵新丽 .新疆天然胡杨林 土壤微生物多样性的研究 .北京林业大学学报.2007: 5.
24
[7] Shimizu M, Nakagawa Y, Sato Y, et al. Studies on endophytic • actinomycetes (I): Streptomyces sp. isolated from • Rhododendron and its antifungal activity? J Gen Plant • Pathol, 2002, 66(4): 360−366.
2008级硕士研究生毕业论文开题报告
塔河中游胡杨内生细菌的分离 鉴定及多样性分析
姓 名 ：卡依尔·玉素甫 指导教师 ：艾尔肯·热合曼 教授 专 业 ：微生物 研究方向 ：资源微生物
资源微生物实验室
1
报告内容
• 1 研究背景、目的及意义 • 2 研究内容、技术路线及可行性 • 3 预期结果 • 4 研究计划 • 5 参考文献
论文 • 2011年5月-2011年6月 送审论文，毕业答辩
23
5.参考文献
• [1] 杨海莲,孙晓璐.宋末.植物内生细菌研究.微生物通报, 1998,25(4):224- 226.
• [2] 赵东红,陆玲,秦怀兰.一种微生物发酵产蓝色素的稳定性及毒研究. 食品与发酵工业,1998,24(5).
• [3] 东秀珠, 蔡妙英. 常见细菌系统鉴定手册. 北京: 科学出版社, 2001. • [4] 谷苏, 邵华, 蒋晓华, 等. 药用植物内生真菌多样性及其活性成分的