山东大学实验报告2009年11月日
姓名郑冲冲系年级08级生科一班组别同组者张健康于政达
学号200800140207题目酵母菌的培养、形态观察、死活鉴定和子囊孢子的观察
一、目的要求
1、掌握酵母培养基的配置和酵母菌的接种方法
2、观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。

3、学习掌握区分酵母菌死、活细胞的实验方法。

4、学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。

二、基本原理
1、培养基：酵母菌的能源主要是糖，一般用麦芽汁琼脂培养基培养。

但实验要求不是很严格时，可以用由酵母膏、蛋白胨、葡萄糖配置的培养基来培养；但酵母菌子囊孢子的观察要用麦氏培养基，其有利于子囊孢子的形成。

2、酵母菌的形态：酵母菌是多形的、不运动的单细胞真核微生物，菌体比细菌大。

繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。

本实验通过用美蓝染色浸片和水-碘液来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。

3、美蓝染色液：美蓝为无毒性染料，其氧化型为蓝色，而还原型为无色。

用它对酵母菌染色时，由于活细胞的新陈代谢作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色；对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。

因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。

4、水-碘液染色液：该染液将革兰氏染液用碘液用水稀释4倍后得到的，亦可用于酵母形态和出芽生殖的观察。

4、子囊孢子的观察：酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，麦氏培养基有利于酿酒酵母子囊孢子的形成，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。

三、实验器材
1.菌种：酿酒酵母培养数天的酵母-麦氏培养基斜面
2.溶液与试剂：0.1% 吕氏碱性美蓝染液，5%孔雀绿，0.5%沙黄、95%乙醇，水-碘染液
3.培养基：酵母液体培养基，麦氏培养基。

4.仪器或其他用具：显微镜，载玻片，盖玻片，酒精灯、接种环等。

四、实验步骤
1、酵母培养基的配置：蛋白质2%，酵母膏1%葡萄糖2%，加冷水100Ml，自然PH，在115℃下高压蒸汽灭菌30min。

2、接种和培养：无菌操作下，在灭菌的培养基中倒入少许酵母菌液即可。

在28℃下培养48h 左右。

3、美蓝染色操作：
1>在载玻片中央加一滴吕氏碱性美蓝染色液，用接种环挑取少量酵母菌液，混合均匀；
2>用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上，避免产生气泡；
3>将制片放置约3min，先低倍镜后高倍镜观察酵母形态和出芽情况，并根据颜色区别死活细胞。

4>染色开始到过30min期间，观察死活细胞数量的变化；
4、水-碘液浸片法：滴加一滴水-碘液在载玻片的中央，无菌操作挑取少许酵母菌液至于染
液中涂匀，盖上盖玻片后镜检。

5、子囊孢子的观察：
1>. 制片：取经产孢培养的酵母斜面培养物，在洁净载玻片上按常规涂片、干燥固定。

2>. 染色：滴加孔雀绿染液染色1min，水洗。

3>. 脱色：用95% 的乙醇脱色30s，水洗。

4>. 复染：用番红复染1min，水洗，干燥。

5>. 镜检：干后用油镜观察子囊孢子的形态。

五、实验结果及分析。