碱性蛋白质活性胶的配置
Shmily2012逍遥居士
各种蛋白质分子由于所含的碱性氨基酸和酸性氨基酸的数目不同，因而有各自的等电点。

凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏碱性，如组蛋白、精蛋白等。

反之，凡酸性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点就偏酸性，人体体液中许多蛋白质的等电点在pH5.0左右，所以在体液中以负离子形式存在。

从某种意义上来讲，碱性蛋白质也就是其等电点大于7.0，在碱性范围内。

所以，碱性蛋白质活性胶电泳，我们应该用酸性缓冲液的活性胶，因为在酸性缓冲液下，碱性蛋白质带正电荷，从电泳槽的阳极向阴极移动。

分离碱性蛋白时候，要利用低pH凝胶系统，分离酸性蛋白时候，要利用高pH凝胶系统。

酸性蛋白通常在非变性凝胶电泳中采用的pH是8.8的缓冲系统，蛋白会带负电荷，蛋白会相阳极移动；而碱性蛋白通常电泳是在微酸性环境下进行，蛋白带正电荷，这时候需要将阴极和阳极倒置才可以电泳。

碱性蛋白质活性胶即酸性缓冲液的活性胶---低pH的缓冲液系统。

配方如下：
β-Ala NH2CH2CH2COOH=89.09
甲基绿Methyl Green分子式：C27H35Cl4N3Zn分子量：608.78
酸性非变性电泳工作液配制：
40%胶贮液(Acr:Bis=29：1）
4×分离胶Buf(pH4.3,0.24M KOH-HAc)：1.346g KOH,以HAc调pH至4.3，Milli-Q 定容至100ml。

4×堆积胶Buf(pH6.8,0.24M KOH-HAc)：1.346g KOH,以HAc调pH至6.8，Milli-Q 定容至100ml。

5×电泳Buf（pH4.4,β-Ala-H Ac）：35.64gβ-Ala，以HAc调pH至4.4，dH2O定容至1L。

即0.4M的丙氨酸缓冲液，1×buffer的为0.08M。

2×甲基绿上样Buffer：1ml1×（pH4.4,β-Ala-HAc）电泳缓冲液，3ml甘油，1ml0.4g/L 甲基绿，5ml dH2O；-20℃贮存。

即：2×甲基绿上样buffer：1ml1×（pH4.4，β-Ala-HCl）电泳缓冲液，3ml甘油，0.4mg甲基绿，6mlH2O；-20℃保存。

10％APS
0.25％考马斯亮蓝染色液：Coomassie blue R-2502.5g，甲醇450ml，HAc100ml,dH2O
450ml
考马斯亮蓝脱色液：100ml甲醇，100冰醋酸，800ml dH2O
电泳胶的配制及电泳条件（酸性电泳注意要反转电极，即上槽电极为正，下槽电极为负）：
酸性非变性胶17%分离胶(10ml)4%堆积胶(5ml)
40%胶贮液(40%T,3.3%C） 4.25ml0.5ml
4×分离胶Buf(pH4.3,0.24M KOH-HAc) 2.5ml
4×堆积胶Buf(pH6.8,0.24M KOH-HAc) 1.25ml
水 3.15ml 3.15ml
10％APS75ul75ul
TEMED25ul25ul
5×电泳Buf（pH4.4,β-Ala-HAc）200ml稀释到1L
各缓冲液的终浓度：
分离胶：0.06M KOH，0.376M Ac，pH4.3（7.7%T，2.67%C）；
堆积胶：0.06M KOH，0.063M Ac，pH6.8（3.125%T，2.5%C）；
电泳缓冲液：0.14M2-丙氨酸，0.35M Ac，pH4.5？浓度可能影响不大。

将正负电极倒置，用甲基绿（0.002%）为示踪剂
电泳条件：反转电极，100V恒压约15min，指示剂进入浓缩胶；改换160V恒压，当指示剂移动到胶板底部时，停止电泳，整个过程约60min。

染色和脱色：取出胶板于0.25％考马斯亮蓝染色液中染色约30min，倾出染色液，加入考马斯亮蓝脱色液，缓慢摇动，注意更换脱色液，直至胶板干净清晰背景。