植物组织培养实验报告
一实验目的
让植物组织经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。

二实验原理
植物组织培养是把植物的器官，组织以至单个细胞，应用无菌操作使其在人工条件下，能够继续生长，甚至分化发育成一完整植株的过程。

植物的组织在培养条件下，原来已经分化停止生长的细胞，又能重新分裂，形成没有组织结构的细胞团，即愈伤组织。

这一过程称为“脱分化作用”，已经“脱分化”的愈伤组织，在一定条件下，又能重新分化形成输导系统以及根和芽等组织和器官，这一过程称“再分化作用”。

植物激素在此过程中起着重要的作用，吲哚乙酸（IAA ）和 6 –苄基氨基腺嘌呤（6 – BA ）的比例，决定了根和芽的分化。

三实验器材
（一）试剂
乙醇、IAA 或 2 ，4 – D 、HgCl 2 （或次氯酸钠）、6- 苄基氨基腺嘌呤（6-BA ）
MS 培养基
（二）仪器设备
培养室，高压灭菌锅，水浴锅，解剖刀，三角烧瓶（100mL ），烧杯，量筒，培养皿，超净工作台，分析天平，长镊子，剪刀，橡皮筋等
三实验步骤
1. 配制培养基
（1 ）愈伤组织诱导培养基：MS 培养基（蔗糖含量为10 g/L ，2,4 – D 含量为2 mg/L ，琼脂10 g/L ）。

（2 ）试验培养基：在MS 培养基中按表33 – 1 加入IAA 和6–BA 。

吲哚乙酸先用少量0.1 mol/L NaOH 溶解，6- 苄基氨基腺嘌呤先用少量0.1 mol/L HCl 溶解，然后用蒸馏水稀释，再加入培养基中。

2. 培养基灭菌
将配好的培养基加入琼脂加热溶解，调至pH 5.8 ，趁热分装于100 mL 三角烧瓶中，每瓶约20 mL 。

待培养基冷却凝固后，用两层称量纸包扎瓶口，并用橡皮筋扎牢，然后在高压灭菌锅中121 ℃（ 1 kg/cm 2 ）下灭菌20 min 。

取出三角烧瓶放在台子上，
冷却后备用。

接种操作所需的一切用具（如长镊子、解剖刀、剪刀等）及灭菌水，需同时灭菌。

3. 诱导产生愈伤组织
（1 ）取健壮的玫瑰、菊花茎数段，每段约5 cm 长，于烧杯中用0.1% 氯化汞（升汞）浸泡20 min ，取出用无菌水洗3 ～ 4 次，置于无菌培养皿中，在接种箱中按无菌操作要求剥去外皮（接种箱事先用紫外灯灭菌30 min ），用解剖刀切成5 mm 厚的圆片（弃去开始一片和最后一片），用长镊子将它接种在诱导培养基上，注意圆片的切口朝向培养基，每瓶接种4 片，接种后扎好瓶口。

（2 ）将已接入植物组织（外植体）的三角烧瓶，培养在25 ℃温室中，每星期检查l ～2 次，剔除材料已被杂菌污染的三角烧瓶，3 ～4 周后产生愈伤组织。

（3 ）选取愈伤组织生长良好的三角烧瓶，用解剖刀将愈伤组织切下，转移到含有不同激素的试验培养基中（也可以连同原来的外植体一起转移），每瓶放1 ～ 2 块，仍培养在25 ℃温室中，每周1 ～2 次观察不同处理的三角烧瓶中，愈伤组织分化情况，直至长出根和芽。

长成的幼小植株即为“试管苗”，可移栽于花盆中。

四实验结果
因为时间有限及实验严密性等问题，大部分都失败了，但是仍然有小部分分化发育了出来。

已经证明了植物组织能够经过脱分化作用，形成愈伤组织，经过再分化作用，愈伤组织又能重新分化为有结构的组织和器官，最终形成完整的植株。