mydye 发表于 2006-3-4 14:37:00AgNOR染色法:1、试剂配制：（1）AgNOR染色液：甲液：明胶2 g 溶于双蒸水至99 ml，在60℃使之完全溶解，再加入纯甲酸1 ml 摇匀待用。
乙液：硝酸银50 g 溶解于双蒸水中至100 ml，4℃冰箱保存。
（2）AgNOR工作液取甲液10 ml，乙液20 ml 临用前混合。
2、步骤：（1）切片脱蜡至水（2）双蒸水洗2次（3）AgNOR 工作液中（25℃）浸染30分钟（暗处进行）（镜下观察）（4）双蒸水洗3次（5）脱水,透明,封固3、结果：油镜观察，细胞核及胞质背景为淡黄色， AgNOR呈棕黑色颗粒状。
B鞭毛染色法:１．试剂配制：甲液：丹宁酸５克氯化铁（ＦｅＣｌ3）１．５克福尔马林（１５％）２．０毫升氢氧化钠（ＮａＯＨ）１％１．０毫升乙液：硝酸银（ＡｇＮＯ3）２克蒸馏水１００毫升制备乙液时，待硝酸银溶解后，取出１０毫升备用，向余下的９０毫升硝酸银液中滴加浓氢氧化铵，先呈很浓厚的沉淀，再继续滴加至刚刚溶解沉淀成澄清液为止。
再将备用的硝酸银溶液慢慢逐滴加入澄清液中，先呈现薄雾，但轻摇则消失，继续边滴加边摇动，待澄清液呈现略有轻微不消散的薄雾状为止。
如雾重，则银盐沉淀，不宜使用。
２．染色方法：（１）将待检菌接种在新制备的肉汤琼脂斜面上，置３７°培养１６—２０小时，备用。
（２）在载玻片的中部相隔一厘米处，用接种环各沾一滴蒸馏水，然后用接种环挑取湿润处的菌苔少许于一端的水滴中，倾斜玻片使培养物流至另一水滴中，两水滴自然相通，菌体从上位自然扩散到下位水滴中，待干燥后染色。
（３）在干燥涂片上加甲液３—５分钟，用蒸馏水冲洗。
将残水沥干或用乙液冲去残水后，加适量乙液保持３０—６０秒钟。
染色时在酒精灯上稍加热，使染液出现蒸汽即可，用蒸馏水冲洗。
（４）镜检：菌体及鞭毛皆染成茶色。
３．注意事项：（１）染液最好随用随配，存放至次日效果则差。
（２）一定要充分洗净甲液后再加乙液，否则背景较脏。
（３）防止水及培养物沾有氯化物。
（４）切忌用接种环涂抹培养物。
（５）载玻片一定要洗净。
先用洗衣粉煮沸，再水洗，干后放在洗液中，浸泡２４小时，取出水洗除去残酸，沥干，存放于９５％乙醇中备用。
（６）加热时最好置金属板上，使载玻片受热均匀。
β－半乳糖苷酶可以催化二糖乳糖水解为单糖：葡萄糖和半乳糖。
β－半乳糖苷酶的活性可以用X-gal（5-溴－4-氢－3－吲哚－β－D－半乳糖苷）等显色底物加以检测，β－半乳糖苷酶可将X-gal转变为不溶性的深蓝色沉淀。
X-gal可以做为组织染色剂，可以在所有表达β－半乳糖苷酶的植物和动物组织上产生颜色。
应该是可以用来病毒感染组织切片染色的。
CCAE染色步骤1、试剂配制：（1）A液：萘酚-AS—D氯醋酸10mg溶于N,N-二甲基甲酰胺1ml中。
（2）4％副品红液：取盐酸副品红(EM级)1g，溶于蒸馏水20ml内，再加入10m1／L的HCl 5m1，稍加温以增加溶解度，过滤、贮室温下。
于使用前，取等量副品红液与新鲜的4％亚硝酸钠混合，之后用淀粉碘化物试纸测试，瞬间试纸应变为蓝色才合格，如果不变色，应加入更多的亚硝酸盐。
（3）B液：o．1mol/L的Michaelis Veronal-醋酸缓冲液(PH 7.6)30ml，加入新配制的副品红液3滴，用1moI／L HCl使PH值调至6．3。
2、染色步骤：（1）将A.、B二液混合，过滤，加入氟化钠(17mg/10ml), 使之最后浓度为0.04mol/L.（2）切片置于上述溶液内孵育1h(30℃)（3）流水冲洗。
（4）苏木素复染。
（5）空气干燥后封固。
GGrimelius硝酸银反应法（嗜银反应）:1、试剂配制：硝酸银液: 1%硝酸银水溶液 3毫升蒸馏水 87毫升0.2M醋酸缓冲液(PH5.6) 10毫升还原液: 对苯二酚 1克亚硫酸钠 5克蒸馏水 100毫升2、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）60℃硝酸银液内3小时（3）用滤纸吸去周围银液,蒸馏水速洗（4）入45℃的还原液处理1分钟（5）蒸馏水洗（6）5%硫代硫酸钠处理1 分钟(可不做)（7）水洗,脱水,透明,封固3、结果：嗜银颗粒呈棕黑色。
正常时嗜银颗粒存在于神经内分泌细胞，故此法主要用于神经内分泌肿瘤的诊断。
HHID染色法1、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）放入预热的1当量盐酸中10分钟（3）蒸馏水洗（4）Schiff液中染10分钟（5）自来水洗15分钟至细胞核红色（如2～5步不做，可在染好爱先蓝后染核固红2分钟）（6）蒸馏水洗（7）高铁二胺液 18～24 小时（8）爱先蓝液(pH2.5)染10～20分钟（9）蒸馏水洗（10）脱水,透明,封固2、结果: 硫酸化酸性粘液呈棕黑色,羧基化酸性粘液（唾酸粘液）物质蓝色。
硫酸化酸性粘液可见于大肠粘膜，而小肠粘膜仅出现唾酸粘液，此法多用于确定肠化的分型。
HP（硝酸银法）1、试剂配制：（1）醋酸缓冲贮备液，PH3.60.2N醋酸缓冲液，PH3.6 10 ml蒸馏水 240 ml以下各液均用此液配制（2）1 %硝酸银液硝酸银 1 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml（3）2 %硝酸银液硝酸银 0.2 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml（4）5 %明胶液明胶 5 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 100 ml先把醋酸缓冲贮备液加温至40℃左右，然后倾入明胶，于37℃温箱内慢慢溶解，搅拌。
（5）3 %对苯二酚液对苯二酚 0.3 g醋酸缓冲贮备液，PH3.6 10 ml（6）明胶对苯二酚液3 %对苯二酚液 1 ml5 %明胶液 15 ml（7）显影液明胶对苯二酚液 16 ml2 %硝酸银液3 ml在操作到第4步完成前5分钟充分混合，置于56℃水浴箱中保温待用。
2、操作方法：（1）组织脱蜡至蒸馏水（2）醋酸缓冲贮备液洗2次（3）入1 %硝酸银液中，56℃，1小时（4）切片不水洗，直接放入预热的显影液中56℃，肉眼呈黄棕色为止。
（5）倾去显影液，于56℃的水中浸洗2分钟（6）水洗（7）脱水，透明，封固。
3、结果：幽门弯曲菌呈棕黑至黑色。
Highman甲醇刚果红染色法（类淀粉染色）1、试剂配制：甲醇刚果红染液: 刚果红 0.5 g 甲醇 80 ml 甘油 20 ml碱性乙醇分化液: 氢氧化钾 0.2 g 80%乙醇 100 ml2、染色步骤:（1）切片脱蜡至水（2）甲醇刚果红染液染10～20分钟（3）用碱性乙醇分化液分化数秒（4）水洗（5）苏木素复染2分钟（6）水洗（7）脱水,透明,封固3、结果：淀粉样物呈桔红色。
4、类淀粉染色的应用：确定淀粉样变性及玻璃样变性的胶原组织，后者在刚果红法染色后呈淡桔色，常用于诊断甲状腺髓样癌和胰岛细胞瘤等。
L六胺银染色法1、试剂配制：六胺银液配制：3%六次甲基四胺水溶液 5 ml2.5%硝酸银水溶液 0.5 ml摇晃，变清，再加2.5%四硼酸钠1.5~2 ml加蒸馏水至30~40 ml2、步骤：（1）切片脱蜡至水，蒸馏水洗（2）0.5%高碘酸浸15分钟，蒸馏水洗（3）六胺银液60℃，1-2小时，（或六胺银液80-90℃，半小时左右）蒸馏水洗（镜下基底膜呈黑色）（4）0.2% 氯化金调色数秒（5）丽春红淡染（6）水速洗（7）烘干，透明，封片。
3、结果：肾小球基底膜呈黑色，霉菌，弹力纤维及一些网状纤维也呈黑色。
MMallory 三色法1、步骤（1）切片脱蜡至水（2）0.5%酸性复红水溶液1 min（3）蒸馏水洗（4）入下液1-2min苯胺蓝0.5g，桔黄G 2g，磷目酸或磷钨酸 1g，蒸馏水100ml。
（5）蒸馏水洗（6）95%乙醇分色（7）脱水，透明，封片。
2、结果：胶原纤维蓝色，红细胞桔黄色，核红色。
M allory磷钨酸～苏木素染色法（PTAH）1、试剂配制：苏木素 0.1 g 磷钨酸 2.0 g 蒸馏水 100 ml先将苏木素加热溶于20毫升蒸馏水,再将磷钨酸溶于80毫升蒸馏水。
等苏木素冷却后，加入磷钨酸溶液，混合，放置数星期后，才可使用。
如急用，可加入0.2 g高锰酸钾,加速其成熟。
2、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）放入0.25%高锰酸钾水溶液5分钟。
（3）蒸馏水洗。
（4）2.5%草酸漂白5分钟。
（5）蒸馏水洗多次。
（6）置于磷钨酸苏木素溶液12～24小时。
（7）95%酒精快速分化，滤纸吸去剩余酒精，置60℃温箱中烘干。
（8）二甲苯透明，封固。
3、结果：纤维胶质，肌胶质，神经胶纤维，纤维素，横纹肌等均染成蓝色。
胶原，网状纤维和骨基质着黄色或砖红色。
在工作中常用于观察横纹以证实肿瘤细胞是否有横纹肌分化特征。
Masson 三色染色法、1、试剂配制：丽春红酸性品红液：丽春红 0.7 g 酸性品红 0.3 g蒸馏水 99ml 冰醋酸 1 ml苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g 蒸馏水 98 ml 醋酸 2 ml亮绿液：亮绿 0.2g 蒸馏水 100 ml 冰醋酸 0.2 ml苦味酸酒精液:苦味酸在95%酒精中的饱和液 20 ml,加95%酒精10 ml 2、染色步骤：（1）切片脱蜡至蒸馏水（2）苏木素染5～10分钟（3）盐酸酒精分化（4）流水蓝化，蒸馏水洗(苏木素可不染)（5）丽春红酸性品红液中染5～8分钟（6）蒸馏水洗（7）1% 磷钼酸中染1～3分钟（8）不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液5分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)（9）水速洗，置60℃温箱中烘干，二甲苯透明,封固3、结果:胶原纤维蓝色（苯胺蓝复染）或绿色（亮绿复染）,肌纤维、纤维素红色。
4、注意：（1）此法广泛用于胶原纤维和平滑肌的鉴别，也为肾组织活检，观察肾小球病变的重要染色法，常用于观察缺血病变的心肌。
用于观察肾小球病变时，一定要用2um以下半薄切片。
（2）细胞核染色后分化很重要，观察控制着色程度。
而HE染色则是最常用的一种常规染色方法，但无法区别胶原纤维和肌肉。
N粘液染色（一）PAS染色法与染糖元的方法相同。
（二）AB(pH2.5)染色法1、试剂配制：爱先蓝8GX 1 g 蒸馏水 97 ml 冰醋酸 3 ml核固红液: 核固红 0.1g 硫酸铝 5g 麝香草酚 50mg 蒸馏水 97ml2、染色步骤:（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）爱先蓝液染10～20分钟（3）蒸馏水洗（4）核复染(核固红5分钟)，水洗（5）脱水,透明,封固。
唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。
常用于确定胞浆内空泡的性质，特别是当细胞呈现印戒样特征时。
J甲基绿派洛宁法（改良Cook，1974）1、试剂配制：（1）2%甲基绿水溶液：甲基绿（methyl green）1g蒸馏水加至50ml用三氯甲烷抽提，方法详后。
（2）5%派洛宁水溶液：派洛宁G（pyronine G）1g蒸馏水加至20ml（3）0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8）0.2M醋酸液41ml0.2M醋酸钠液59ml（4）甲基绿派洛宁染液：2%甲基绿水溶液（经抽提） 5ml5%派洛宁水溶液 1ml蒸馏水 12ml0.2M醋酸盐缓冲液（pH 4.8） 18ml甲基绿水溶液的抽提：甲基绿为绿色粉末，属三苯甲烷染料，这种染料是由氯代甲烷作用于结果晶紫而形成的一种化合物。