定标方法
对于终点法和两点速率法，必须通过使用标准液，建立 一条标准曲线。 速率法检测的酶类可以采用理论因数法（K因数或 Factor法），不过目前，大多数实验室对酶类（速率法） 测试亦采用标准液校正Factor的方式，以消除仪器和试 剂的系统误差。
定标方法——2点定标
两点定标：以水作为零点，标准液作为另一点，建立标 准曲线。此方法适用于浓度随吸光度变化呈线性变化的 试剂。曲线的方程为：Y=AX 对于一些特殊试剂如：K，Na，CL，因水中痕量离子浓 度的存在或者线性范围限制，一般不以水作为零点，而 采用定值的高、低两个标准液，建立标准曲线。曲线的 方程为：Y=AX+B。
连续监测速率法的反应曲线
两点速率法
两点速率法适用于反应吸光度随时间的变化而变化，在 一定时间内无到达终点的趋势，该反应的变化规律为在 一定时间内反应的趋势为直线或接近于直线。 设定参数时选择在直线上的两个点作为检测点。
速率法的吸光度计算
速率法吸光度计算： 如读点为21-26 ; 用最小二乘法，得到测光点21-26间每分钟吸光度的变化量。 两点速率法吸光度计算: 如读点为21-26 ; T 为：(26-21) 点间隔的时间 [(A26+A25)/2-(A21+A20)/2]/T
分立式自动分析仪的主要部件
加样系统 比色系统 分光系统 供排水系统 清洗系统 操作控制与数据处理系统
加样系统
试剂仓 样品转盘、进样架系统（样本放入区、条码扫描通道、 测定缓冲区、样本回收区） 样品取样单元 试剂取样单元 混合部件
比色系统
光源 比色杯 分立式比色转盘 比色杯恒温 水浴、空气浴、恒温液循环间接加热 比色杯类型 硬质石英/玻璃、塑料，永久、半永久、一次性。
终点法反应曲线举例（单试剂）
6000 5000 4000 3000 2000 1000 0 0 5 10 15 20 25 30
终点法反应曲线举例（单试剂）
终点法反应曲线举例（双试剂）反Biblioteka 曲线 1000 800吸光度
600 400 200 0 0 5 10 15 20 25 30
点数
终点法反应曲线举例（双试剂）
终点法
终点法 终点法可根据试剂原理不同设置为（一点）终点法和两 点终点法。 对于单一试剂，在加入标本后，反应即可进行，在反应 达到终点后，读取反应点（吸光度），故一般选用一点 终点法。 对于两种以上的试剂，加入第一试剂，主要起缓冲或者 消除干扰等作用，此时可读取初始反应点，加入第二 （或第三）试剂后，在反应达到终点后，读取结束反应 点。此即两点终点法。 本质均为终点法。
比 色 杯 比 色 杯
比 光电感应器检测 色 传 输
比 色 杯
比 色 杯
比 色 杯
打印机打印结果
传输
计算机进行计算
自动分析仪的基本分析方法
终点法 （1点）终点法和2点终点法 速率法 速率法和2点速率法（固定时间法）
终点法
被测物质（反应底物）在化学反应过程中完全被消耗或 转换，即反应达到平衡（终点），通过测定产物（反应 生成物）的多少来定量测定被测底物的含量。 终点法一般用来检测代谢物的浓度，通过测定标准液 （校准液）的反应吸光度，建立一条浓度与吸光度变化 的标准曲线。 通过检测标本的吸光度与标准液的吸光度进行比较，计 算出该标本中待测物的浓度。
生化分析仪原理
检验科 吴 迪
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临床生化自动分析仪分类
按运行速度： 1．大型生化仪速度600 test / 小时以上 2．中型生化仪速度300-600 test / 小时 3．小型生化仪速度300 test /小时以下 按仪器结构： 1．流动式自动生化分析仪 2．离心式自动生化分析仪 3．分立式自动生化分析仪
终点法反应曲线举例（双试剂免疫比浊法）
APOB 反应曲线
6800 5800 4800 3800 2800 1800 800 -200 0 5 10 15 测光点 20 25 30
吸光度值
速率法
速率法分为：连续监测速率法和两点速率法（固定时间 法）。 连续监测速率法：在可见光区(GGT、ALP：405nm黄色) 或紫外（HBDH 、LDH、ALT： 340nm）在一段时间内 连续监测某一物质的生成 (或消耗的) 速率，计算待测物 的活性，一般用于样本中酶活性的检测。 酶促反应，在一定条件和测定范围内，当Km〉〉底物浓 度，符合零级速率法，底物消耗/生成的速率只与催化反 应的酶的活性有关，为正比例关系，直线的斜率为定值 （即K值或factor）
多点定标的标准曲线
主波图（340nm)
21000 18000 15000 12000 9000 6000 3000 0 0 50 100 150
浓度
吸光度
200
250
300
350
多点定标的标准曲线
多点定标的标准曲线
自动生化分析仪的操作控制系统
仪器操作和控制软件的功能： （1）设置系统参数 （2）设置项目参数 （3）设置试剂参数 （4）设置校准品和质控品参数 （5）实施校准和质控测试 （6）进行样品测试 （7）结果查询 （8）反应全程监控 （9）执行维护
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自动生化分析仪的上机参数
生化分析仪的参数就是仪器工作的指令，操作者通过设 置正确的参数控制仪器完成一系列复杂而有序的操作程 序，主要包括试剂量、样本量、测定方法、校准方法、 反应时间、测定波长和控制因素等。通常各个机型性能 不同，参数设置也不同。 具体情况可上机观看。
2017年11月17日
分光系统
干涉滤光片 光栅分光式 无相差蚀刻凹面光栅 后分光集束式光路系统
关于双波长检测的优点
通过计算两个波长之间的差值，可纠正样品中脂血、溶 血和黄疸干扰的影响；也可补偿电压波动的影响，从而 获得稳定的测定结果。
自动生化分析仪的工作程序
样 本
试 剂 1
搅 拌
延迟
试 剂 2
搅 拌
反应
2点定标的标准曲线
工作曲线
吸光度*10000
20000 15000 10000 5000 0 -0.1
0.2
0.5
0.8
1.1 浓度
1.4
1.7
2
2.3
2点定标的标准曲线
定标方法——多点定标
多点定标：采用两个以上的标准液来建立一条标准曲线。 该曲线的特征一般为非线性，即吸光度与浓度的变化不 是直线关系。计算方式在自动生化仪上可选择为： SPLINE或LOGIT-LOG法。 对于一些通过（胶乳增强）免疫比浊法测定的试剂，多 为此方法。因为抗原抗体反应形成的浊度的线性范围较 窄。