microarray are typically less than 200 microns in diameter
Gene chips的制备
在片原位光刻合成
•
O d NTP- 5´-光敏保护基因
光照 O dNTP-OH + dNTP -5´-保护基因
在片原位喷印合成
Gene chips的制备
蛋白芯片的原理
1.将抗原或抗体交联（UV）或吸附在膜上
不均等硝酸纖維膜的空氣面結構
• SEM AE 100 (12 µm), air side, 500 x
背裱濾紙的硝酸纖維膜橫切面圖
• SEM FT 020 (0.2 µm), cross-section, 150 x
2. 抗体或抗抗体标记示踪 ①酶：HRPO、AKP ②胶体金
常用的双色荧光标记试剂有Cy3-dNTP和Cy5-dNTP。它们 在反转录过程中在DNA中的结合性好，激发和发射谱的间 距大，以及光量子产率高。亦可标记酶和生物素。
核酸雜交芯片原理
POTOMAC
基因芯片实验程序
基因芯片实验程序
Gene chips的应用
病原体的检出 肿瘤相关基因表达谱 位点突变 遗传性疾病 测序 耐药基因检测 疾病的分子分型 HLA分型
• Microscopic elements: ①Semiconductor tech produce 15~30μm features ② Printed spot size is 50~350 μm ③ Tissue spot is 200~600 μm
Macroarrays contain sample spot sizes of about 300 microns or larger
生物芯片技术及其应用
南京医科大学第一附属医院 临床检验中心 童明庆
1.What is a microarray
• Microarray 或 Biochip （生物芯片）是
一种微型多参数生物传感器。它通过在一微小 的基片表面固定大量的分子识别探针，或构建 微分析单元和系统，实现对化合物、蛋白质、 核酸、细胞或其它生物组分准确、快速、大信 息量的筛选或检测。
Four distinct characteristics of microarray :
• Microscopic target elements or spots; • Planar substrates; • Rows and columns of elements; • Specific binding between microarray target
and United States of America. In U.S.A. the probe are usually in solution. In China the probe is a reagent to detect target
from sample.
Biochips的主要类别
蛋白芯片 Protein chips(protein microarray)： 肽芯片，蛋白芯片 基因芯片 Gene chips（Gene microarray）： 靶DNA芯片，多探针芯片 ③芯片实验室Laboratory-on-a-chip or Microfluidics-based chip
• A microarray is an ordered array of
microscopic elements on a planar substrate that allows the specific binding of genes or gene products.
1.What is a microarray
③荧光素：Cy3、Cy5、FITC、RB200、藻胆 蛋白等
3.检测标本中的抗体或抗原
點抗原測抗體
POTOMAC
點抗原測抗體
2.Microarray manufacturing
The three main manufacturing methods: • Contact printing:uses direct contact between the
printing implement or the sample contained in the implement and the microarray substrate; • Noncontact printing:on-the-fly printing including ink-jet tech.,microsolenoid tech.,and thermal bubble jet dispenser; • Semiconductor tech: photolithographic masks and micromirrors.
element on the substrate and probe molecules in solution.
1.What is a microarray
Which is the probe?and which is the target? There are some differences between China
Stratagene) • 点样后变性
PCR擴增産物被點入(或布陣)至Nytran尼龍膜 上之後,在0.4N NaOH/3M NaCl中浸濕5分鐘變 性DNA,隨後放在用6×SSC浸濕5分鐘中和，再
用120mj/cm2UV交聯固定。
我們有世界第一部量產的點樣機及相關的配套生產線
核酸的杂交
核酸的杂交
cDNA点样法
醛基修饰玻片 Silanized slide（与DNA上氨基反应）
Silane slide
氨基修饰玻片 Silylated slide（UV照射与DNA交联）
Polylysine s前变性 變性的終濃度1×0.4N NaOH/10mM EDTA， 變性的擴增産物被點樣到Nytran尼龍膜上， 用120mj/cm2UV交聯固定(Stratalinker 1800,