精心整理实验二邻菲罗啉分光光度法测定水样中的铁——标准曲线法
一、实验目的：
1．掌握邻菲罗啉分光光度法测定微量铁的原理和方法；
2．学会标准曲线的绘制方法及其使用。

二、原理：
1.
2.
4Fe3+
橙红色配合物
3.
4.
λ
三
可见分光光度计，1cm比色皿、100mL 容量瓶 1个，20mL 移液管 1 支，50mL 容量瓶 10 个， 10mL 吸量管 1 支，1mL 吸量管（或移液管） 1 支，5mL 移液管 1 支，2mL 移液管1 支。

四、试剂：
①铁贮备液（100μg/mL）：准确称取0.7020克分析纯硫酸亚铁铵[（NH4）2Fe（SO4）
O]于100毫升烧怀中（或0.8640g分析纯的NH4Fe(SO4)2·12H2O，其摩尔质量为
2·6H2
.
482.18g/mol），加50毫升1+1 H2SO4，完全溶解后，移入1000ml的容量瓶中，并用水稀释到刻度，摇匀，此溶液中Fe的质量浓度为 100.0μg/mL。

（实验室准备好）②铁标准溶液（20.00 μg·mL－1）移取100.0μg·mL－1铁标准溶液20.00mL 于100mL容量瓶中，并用蒸馏水稀释至标线，摇匀。

(学生自行配制)
③ 10%盐酸羟胺水溶液：（用时配制）。

④ 0.5%邻菲罗啉水溶液：配制时加数滴盐酸能助溶液或先用少许酒精溶解，再用水稀释至所需体积。

（临用时配制）或（避光保存，两周内有效）。

⑤ HAc-NaAc缓冲溶液（pH≈5.0）:称取40克纯醋酸铵加到50毫升冰醋酸中，加水溶解后稀释至100毫升。

五、测定步骤：
1、标准曲线的绘制：
（1）分别吸取铁的标准溶液0.00、1.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00ml于7支50ml容量瓶中，加水至刻度；
（2）依次分别加入10%盐酸羟胺溶液1ml，混匀，加入5ml pH≈5.0缓冲溶液，摇匀，加入0.5%邻菲罗啉溶液2ml，摇匀，
（3）放置15分钟后，在510nm波长处，用1cm比色皿，以试剂空白作为参比，测定各溶液的吸光度。

附721型分光光度计操作过程：
1.检查仪器各调节钮的起始位置是否正确，选择波长，并将灵敏度档置第1档
2.接通电源，打开开关
3盖上比色皿暗盒盖，用调“100%”调节器使电表指针处于透过率“100%”位，打开比色皿暗盒盖，用调“0”调节器使电表指针处于透过率“0”位；预热
20min
4.放入参比溶液及试样溶液
5.校准：拉动吸收池拉杆，使参比溶液置于光路中，打开比色皿暗盒盖，用调
“0”调节器使电表指针处于透过率“0”位；盖上比色皿暗盒盖，用调
“100%”调节器使电表指针处于透过率“100%”位。

重复校正至稳定
.
精心整理
6.若调“100%”调节器不能使电表指针处于透过率“100%”位，打开比色皿暗
盒盖，则应放大灵敏度，重新调整直至稳定
7. 盖上样品盖，拉动吸收池拉杆，依次将待测溶液推入光路，读出吸光度值A。

连续读数后，立即打开比色皿暗盒盖,取出吸收池，参比溶液不取出。

8.再放入其他浓度待测溶液，继续调“0”及”100%”，按前面的“校准”步
骤重新调整直至稳定，再测量其他浓度待测溶液的吸光度A。

七．思考题
（1）T与A两者关系如何？分光光度测定时，一般读取A值，该值在标尺上什么范围好？为什么？如何控制被测溶液的A值在此范围内？。