一、液相色谱历史回顾
超高效液相色谱的发展背景 首先是大量的样品需要在很短的时间内完成； 其次是在生化样品及天然产物样品的分析中，样品 的复杂性对分离能力提出了更高的要求； 第三是在与质谱等检测技术联用时，也提出了更高 的要求。 将HPLC的极限作为自己的起点。
二、仪器介绍与理论基础
ACQUITY H-Class 系统总揽
四、应用与展望
2.药物开发领域
2.1化学药品分析 在针对药物合成的分析方面，UPLC可实现随时快速准确检测合成过 程中的中间体、副产物或降解产物等。
2.2中药药品分析 Waters公司合成了1．7 p．m颗粒度的Acquity UPLC填料，减少了固 定相表面残余硅羟基，因而在分析生物碱类样品时，流动相中只加入酸 抑制剂，不需添加有机胺即可使其获得良好的分离。由于在流动相中避 免了有机胺及盐的加入，可以在一定程度上降低质谱噪音、减少对质谱 的污染，且使用的流速适合与质谱直接联用，无需分流，可以进一步提 高检测灵敏度，为中药分析提供良好的平台。
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灵敏度 载样量 分析速度 溶剂损耗
三、HPLC与UPLC比较
色谱条件的开发思路
根据分析物的化学性质选配色谱条件 – 基于既往经验及思考进行合理猜测 – 通常辅以资料参考 – 询问同事 “步进式”测试开发 – 基于前一测试结果设计下一步的测试条件，逐步进行 系统性筛选策略 – 先按流动相pH、有机相和固定相的直接组合进行系统 性筛选测试 o 评估结果，选择最有效的条件组合 – 再进行方法优化 o 梯度/温度
技术上的突破:UPLC色谱柱技术
二、仪器介绍与理论基础 ACQUITY UPLC H-Class主动预热
二、仪器介绍与理论基础
三、HPLC与UPLC比较
分离度
速度
容量
开发液相色谱方法
• • 分辨率是色谱分离中主要考虑的因素 在开发色谱方法时，有很多因素是很重要的。除分辨率之外，以下几个因素 都要考虑。
三、HPLC与UPLC比较
UPLCTM与HPLC：速度比较
由于 ACQUITY UPLCTM 系统用 1.7 μm 颗粒， 柱长可以比用5 μm颗粒时缩短3倍而保持柱效 不变，而且使分离在高 3 倍的流速下进行，结 果使分离过程快了9倍而分离度保持不变。
三、HPLC与UPLC比较
三、HPLC与UPLC比较
UPLC技术实现更快更有效的方法开 发
能够在一个工作日内完成方法开发! 一、对pH、有机相和色谱柱的组合条件进行系统 性筛查 二、高分辨亚二微米色谱柱技术确保高分辨分离 在更快的同时分离能力不打折扣 三、可自动选择色谱柱和流动相 四、 四元溶剂混合使方法开发更方便
三、HPLC与UPLC比较
使用UPLC的一般建议
色谱
电泳 超滤
一、液相色谱历史回顾
液相色谱40年的发展史是颗粒技术的发展史。 颗粒度的改变直接影响到柱效，从而对分离结 果产生直接影响。由下图可知：随着颗粒度的 不断降低，色谱分离度不断提高。
一、液相色谱历史回顾

高效液相色谱法 – HPLC(High Performance Liquid Chromatography ) – 是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高 效能分离手段: 高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器… – 广泛应用于各个领域: 医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业… – 无论在技术上,理论上,还是在应用上仍有较大 的发展空间
UPLC应用技术简介
生命科学研究中心 现代分析检测平台
目录
1 液相色谱历史回顾
2
仪器介绍与理论基础 HPLC与UPLC比较 应用和展望
3 4
一、液相色谱历史回顾
蒸馏 离心
过滤
常见的分离方式
色谱分离精度高，设备简 单，操作方便，根据各种 原理进行分离的色谱法不 仅普遍应用于物质成分的 定量分析和检测，而且广 泛应用于生物物质的制备 分离和纯化。是目前最好 的生物纯化技术。
四、应用与展望
3.其他领域
农药残留物检测 水质和环境监测 化妆品质量控制
......
四、应用与展望
超高效液相色谱的局限性
尽管UPLC能显著减少复杂样品的分析分离时间，提高检测的灵敏度和分离度，但 目前UPLC的使用仍然存在局限性。
二、仪器介绍矩阵 • 为UPLC专门优化的流动池 • 高速检测
色谱柱管理： 样品管理器：
• 低扩散 • 快速进样周期 • 低交叉污染 • 两个样品盘 • 1.7μｍ细粒径新型固定相 • 液体加热器
四元溶剂管理：
•四元梯度
•在线脱气 •UPLC的耐压能力
二、仪器介绍与理论基础
一、液相色谱历史回顾
自20世纪70年代以来，随着高效液相色谱(HPLC)技 术的不断发展，美国Waters公司于2004年的匹兹堡 会议上推出了最新研制的ACQUITY超高效液相色谱 (UPLC)，其采用1．7 μm细粒径的新型固定相，可 获得高达2万块／m理论塔板数的超高柱效，并以 系统整体设计的创新技术，全面提升了液相色谱 的速度、灵敏度和分离度，造就了液相色谱性能 上的飞跃和进步并形成分离科学的一个新兴领域。
三、HPLC与UPLC比较
使用UPLC的一般建议
三、HPLC与UPLC比较
新鲜流动相的要求
三、HPLC与UPLC比较
器具使用通则
三、HPLC与UPLC比较
方法转换考虑因素
三、HPLC与UPLC比较
UPLC和HPLC区别
四、应用与展望
超高效液相色谱的应用现状 1.食品安全领域
1.1农药残留物检测领域 农药残留分析属于微量至超微量分析范畴，要求检测仪器有非常 高的灵敏度；同时，由于其具有种类繁多、结构复杂等特点，对 检测方法的通量和速度也提出了更高的要求。在农残分析检测中， UPLC与传统的HPLC 相比较，不仅在分离度、灵敏度和分析速 度上得到较大提高，而且很大程度上减少了样品和试剂的消耗量， 具有很好的应用前景。 1.2食品添加剂分析检测中的应用 随着食品品种和添加剂种类的增加、多种添加剂的复配使用，迫 切需要建立多种添加剂同时快速检测的方法。目前，HPLC 技术 Click to add title in here 是食品添加剂检测的最常用方法；而较这一传统方法而言，在技 术性能上拥有优势的UPLC 得到了更突出的应用。