病理学-组织切片制作课件
去掉福尔马林色素颗粒方法:
① Schridde法 25%氨水 l ml
75%酒精
200 ml
切片脱蜡经70%酒精时,用上液浸泡半小时或稍长一 些时间,然后水洗再行染色。 ②Verocay法 l%氢氧化钾水溶液 l ml
70%酒精
100 ml
切片脱蜡经酒精80%时入上液处理10分钟,经70%酒 精入水后即可染色。
取材时注意方向,取管腔脏器的全层构造。 大肠、小肠:应考虑环行皱襞 ,沿肠管的长轴取 (纵切)。
食管、气管:横切面为宜。
胃:常Байду номын сангаас取胃底。
取材后应将被膜面铺在滤纸上,然后入固定液 内,防止或减少组织受压变形与收缩。
有病变的部位,应附带周围正常组织取材。
二、固定
(一)意义:是做好切片的重要步骤之一,如果 首次组织固定不良,再重新固定效果不佳。 检材固定的关键:取材后尽可能地及时地将
优点:①渗透力较强;②组织收缩小;③细胞核染色较好。 缺点:
①质量较差的formalin在低温下久存容易产生一种白色的沉
淀物称“三聚甲醛”(付醛),经氧化成为甲酸而使溶液呈 酸性,影响细胞核染色。可在备用甲醛溶液中放入适量的碳 酸钙或碳酸镁,简便的办法可在溶液中投入适量的大理石或 者白色粉笔作为中和剂。 ②酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色或黑色细颗粒 状物,称为福尔马林色素,在切片上形成黑色小颗粒,不溶 于水和酒精,影响染色效果和切片的观察。
脑:全脑(桥脑、延脑、小脑)、脊髓颈 段及脉络丛,十一块,或根据具体情况决定: ①额极;②前后中央回;③海马;④内囊; ⑤丘脑;⑥枕叶;⑦脉络丛;⑧桥脑;⑨延 髓;⑩中脑; ⑪小脑。取材时要带上软脑 膜、脑室膜或软脊膜因此刀要锋利。需要时 取脊髓。 垂体:前、中、后叶和垂体柄,从前向后 横切。
2.管腔脏器:
2.甲醛:(福尔马林)(formalin)
最常用的固定液,一种还原剂,无色透明极易挥发有强 烈刺激性气味的液体,不能与氧化剂混使用。可应用于组织 学、组织化学、免疫组织化学等染色,最好用时现配。 商品甲醛:37%~40%甲醛水溶液。 固定液的浓度: 4 %~ 8 %(习惯上称为 10 %或 20 %的福尔马 林)。 固 定 时 间 : 常 温 下 固 定 24h ~ 48h 。 快 速 固 定 , 可 加 温 到 70℃~80℃或者加温煮沸10min即可。快速固定,组织块不宜 过厚或过大,缺点是组织收缩较严重。 固定液配制:甲醛 1份与 9 份自来水混合即为 10 %( 4% )浓度 的甲醛固定液。
(三)水洗 1.用水道流水洗涤,彻底清除组织块中的固定液。 2.水洗时间数小时至24小时。 3.根据材料多少、大小可灵活掌握水洗工具,可用水洗 筐或用纱布包裹,防止水流过大将组织块冲掉或丢失。 (四)脱水 组织块固定后虽然已经硬化,但达不到切薄片的硬度, 必须制成石蜡组织块,脱水是继固定后的重要步骤。 经固定和水洗后的组织含大量水分,在这种情况下首先 必须除去组织内部的水分,这种除水的过程叫做脱水,脱 水使用的药剂称为脱水剂。 脱水必须逐渐依次从低浓度酒开始到高浓度酒,否则 引起组织强烈收缩,变脆不利制片。脱水不彻底也很难浸 进石蜡。
亲和力,使细胞各部易于受色。
4.能使组织硬化,为制作薄切片奠定基础。
注意:材料块不能过大,固定器皿不易过小,固
定液量不易过少,应是固定材料体积的20
一30倍。
(二)固定液:
根据检验目的不同选择不同种类固定液,如糖原检查:不含水的固 定液;电镜检查:锇酸固定液等;HE染色:甲醛。 固定液:用以固定组织的药剂。 固定液分类:单纯固定液,由一种药剂组成;混合固定液(或复合), 由二种以上的药剂组成。 1.选择固定液的标准: ①具有强的穿透力,固定均匀,能迅速渗透到组织内部使组织细胞结构 保持生活状态。 ②不使组织过度收缩与膨胀而变形。 ③能迅速使组织中的蛋白质、糖、脂肪等物质凝固成为不溶性物质。 ④使组织达到一定的硬度便于切片制作。 ⑤价格便宜,易购买,配制方便。
所取的材料进行固定,以防止其“死后”变化的
进展,尽力使组织接近于生前状态。为了防止组
织结构及成份的破坏和溶解消失,需要使其转变
为不溶性物质,有利于组织结构保存--固定的基
本意义。
固定的目的:
1. 阻止死后变化,防止组织的自溶与腐败。
2.保存组织的结构及成份。
3.媒染作用,使不同的组织成份对染料有不同
2.单纯固定液 乙醇(酒精)、甲醛(福尔马林)、重铬酸钾、苦味酸、锇酸、丙酮、 冰醋酸 (1)乙醇(酒精)(alcohol) 优点: ①价格低,易购买,易溶于水,使用方便,95%浓度,无水乙醇100%; ②市售有两种:100%;95%; ③能硬化组织起固定作用; ④也是一种最常用的脱水剂。 固定用浓度在70%~80%,酒精浓度愈大组织收缩愈严重,浓度过低起 不到固定作用。 缺点: ①穿透力小,由于被固定的组织表面硬化,固定液不容易渗透到组织中去, 所以用乙醇固定的组织材料要小。 ②使组织严重收缩。 ③由于酒精能沉淀白蛋白、球蛋白和核蛋白,核蛋白的沉淀物易溶于水, 使细胞核核色不佳。。 ④溶解脂肪、血红蛋白和多种色素,脂肪染色必须制作冰冻切片。
(二)方法: 1. 实质器官 心脏:心房、瓣膜、心室。可分别取病变部位带正常 组织。可单独取心室肌,乳头肌,3~5块。 肺脏:左右两肺(五个肺叶);可根据病变需要决定 取材块数,特殊情况下为区别在不同肺叶上取材, 可用形状做标志在记录时记清楚,5~7块。 肾脏:取材包括被膜、皮质、髓质和肾盂,应区别左 右肾,2~4块。 胰腺:取胰体部,必要时加取胰头、胰尾,2块。 肝脏:取长方形或三角形,2~3块。 脾脏:取材带被膜,2~3块。
法医病理学 组织切片制作
HE染色切片
一、目的要求
掌握取材、固定、水洗、脱水、透明、浸 蜡与包埋,切片制作。 (一)取材 1.取材快,新鲜,防止组织腐败。 2.取材刀锋利,垂直地切取,严禁挤压或用钳镊 钳夹,以免使组织或细胞变形造成人为的破坏。 3.取材大小,lcm~3cm×1cm~2cm×0.3cm~ 0.5cm。材料过大在短时间内不易固定透,影响 效果。