6d
4d
6d
沸水浴5~10min，观察颜色差异
2020/4/11
39
• 脱氧核糖的鉴定
管号 测定管 对照管
水解液 20d —
5%H2SO4 —
二苯胺 试剂
30d
20d
30d
沸水浴5~10min，观察颜色差异
2020/4/11
40
注意事项
• 1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标 • 号朝试管上方 • 2、玻璃棒搅拌要轻柔 • 3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染
HCl 3滴，
摇匀，观察结果
继续滴加，记录变色时所
加HCl滴数
13
➢ 注意事项：
2号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去 吸量管的使用 pH计的使用
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14
吸量管的使用
1、看清刻度，选择适当容量的吸量管 2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管
口，稳住液面 3、拿吸量管的时候，刻度面向自己 4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以
轻轻搅动 4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位
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实验三 动物组织中核酸的提取与 鉴定
• 实验目的： • 1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定 • 2、掌握离心机的使用 • 3、熟悉加样器的使用
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30
• 实验原理 • 1、提取原理：
• a: DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。
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• 分离提取
于全部匀浆内加入生理盐水2ml，玻棒混匀 静置3min， 3000rpm 3min, 弃上清 沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌 取出冷却，3000rpm 3min 取上清，逐滴95%酒精2管，混匀 静置5min，3000rpm 5min 弃上清，得白色核酸钠
—
—— 4 — —
—
—— — 4
4
—
— — — — 10
10
10 10 10 10 —
1-5管于沸水中加热3分钟，观察结果；6号管加蒸馏水10滴，于沸
水中加热10分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴，班氏试剂10滴
混匀，于沸水中再加热3分钟，与5号管比较，记录结果
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4、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象
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41
移液枪的使用
1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（ 最大刻度和读数的关系）
2、先调好刻度 3、打至第一档吸入试剂 4、打出试剂时要按至第二档 5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出
现
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• 离心机的使用
台秤平衡 对称插入 定时定速
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实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应及等 电点的测定
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3
实验一 医化实验基本操作
▪ 玻璃仪器的洗涤 ▪ 吸量管的使用
注意：右手食指按住吸量管口
▪ 溶液的混匀
指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡 混合器混匀等
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4
实验二 电离平衡与缓冲溶液
实验目的
1、掌握同离子效应的原理 2、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液 3、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响 4、学习吸量管及pH计的使用
2、重金属盐类沉淀： 条件：PH > PI，蛋白质带 负电荷 重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+
3、生物碱试剂沉淀： 条件： PH < PI，蛋白质带 正电荷 生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸
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35
• 核酸的水解：
• 短试管内加入5%H2SO4 3.5ml • 玻棒搅匀 • 沸水浴中10min
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36
• 成分的鉴定
嘌呤的鉴定
管号
水解液
测定管
20d
对照管
—
5%H2SO4 浓氨水 5%AgNO3
—
2~3d
10d
20d
2~3d
10d
沸水浴3~5min，观察结果，静置15min,观察结果
医用化学 实验
生物化学教研室 张丽娜
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1
实验课注意事项：
➢ 不迟到，不早退，做好课前预习工作 ➢ 穿好白大褂 ➢ 使用煤气时注意安全 ➢ 试剂用后及时归位 ➢保持严肃认真的实验态度 ➢ 及时记录实验结果，按时完成实验报告
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2
实验报告格式：
1、实验目的 2、实验原理 3、实验操作 4、实验结果（真实、客观） 5、讨论（实验报告的核心） 6、意见与建议（可选择）
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17
2、酚性羟基的反应
（1）苯酚的弱酸性 OH + NaOH
混浊
（2）酚性羟基与FeCl3的显色反应 苯酚 FeCl3 紫色络合物
➢ 可用于鉴别酚和醇
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ONa 澄清
18
3、醛基的反应
O || R-C-H
+ 2Cu（OH）2
（班氏试剂）
O || R-C-OH + Cu2O ↓ + 2H2O
• 茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热， 生成紫色化合物。
• Folin法： 酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝
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操作步骤
（1）
+ 1：10鸡蛋白2滴 + 10%NaOH 5 滴
1%CuSO4 1滴
混匀，观察颜色
（2）
2020/4/11
+ 1：10鸡蛋白4滴 + 蒸馏水10滴
2020/4/11
22
5、尿素的化学性质
O
O
150~160OC
O
O
H2N-C-NH2 +H2N-C-NH2
H2N-C-NH-C-NH2+NH3
O
O
缩 二 脲
H2N - C - NH - C - NH2
CuSO4 碱 性
紫 红 色
（ 缩 二 脲 反 应 ）
缩二脲反应：
OH-
缩二脲 + CuSO4（少量）
紫红色物质
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23
实验操作
1、烯基的反应 + 硬脂酸10滴 + 油酸10滴
+ 植物油10滴
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不是溴水
逐滴加入5%Br2的CCl4溶 液，不断振荡试管，记录 结果
24
2、酚性羟基的反应
（1）
+ 液体苯酚2滴 水5滴，摇匀
+ 10%NaOH 2 滴 摇匀，观察
（2）
+ 0.5%苯酚溶液10滴
10
2、缓冲溶液
（1）
大试管3支
0.1mol/L KH2PO4 0.1mol/L Na2HPO4
精密pH试纸检测 pH计检测
韩-哈方程式计算
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8 ml 2 ml
5 ml 5 ml
2 ml 8 ml
测完pH值 后2管保留
用吸量 管进行 操作
11
（2）另取2支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验
2020/4/11
+ 0.5%水杨酸溶液10滴 + 苯甲醇10滴
各加入1%FeCl3 1滴，观察结果
25
3、醛基反应（大试管6支）
试剂（滴） 40%乙醛液 10%NaOH 丙酮液 1%葡萄糖 1%果糖 1%蔗糖 2mol/L盐酸 班氏试剂
1
2
3
4
5
6
5
—————
5
—————
—
4 ————
— — 4 ———
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5
实验原理
1、同离子效应
例：
HAc
H+ + Ac-
NaAc
Na+ + Ac-
➢ 同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的pH升高
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6
• 酸碱指示剂：
甲基橙 酚酞 溴麝香草酚蓝
红橙
黄
3.1
4.4
无色 淡红
红
8
10
黄
绿
蓝
6
7.6
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7
2、缓冲溶液
➢韩-哈方程式
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21
说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的 混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡。
O
O
||
||
CH3-C-CH2-C-O-C2H5
室温时 酮型（93%）
OH O
|
||
CH3-C = CH-C-O-C2H5
烯醇型（7%）
➢ 凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以 动态平衡存在的现象——互变异构现象
+0.1%茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色
+ 1：10鸡蛋白2滴
+ 0.25%白明胶
0.25%酚溶液 0.25%酪氨酸
蒸馏水6滴+ 10%NaOH3 滴， 酚试剂1滴，混匀，观察颜色
46
二、蛋白质的沉淀反应
• 实验原理： • 1、盐析：破坏水化膜，中和电荷 • 常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl
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• a:磷酸+钼酸铵 • b:嘌呤+AgNO3
氨基萘酚磺酸
磷钼酸 絮状嘌呤银
钼蓝
• c:核糖 H+ 合物
3，5-二羟基甲苯
糠醛
H+