K
注：K为热力学常数
C
S
C
m
实验条件固定，K 仅与组分性质有关
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（6）分配比------容量因子
ms VS ＝ t' / t = V' / V =K R M R M k = Vm mm
important
由色谱分离过程中的热力学因素所决定。 各组分在色谱柱中滞留状况的一个指标 在一定条件下，保留值是定值。
（ t， v ）
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保留时间 （1） 保留时间 t R
从进样开始到组分出现浓度极大点时所需 时间，即组分通过色谱柱所需要的时间 （2）死时间 t M 不被固定相溶解或吸附的组分通过色谱柱 所消耗的的时间 （流动相流经色谱柱所需的时间）
组分i对组分s的相对保留值
柱温、固定相、流动相条件不变， ri,s 不变
ri,s值越大，分离越易实现， ri,s ＝1时，
两组色谱峰重叠。
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相对保留值是指某组分2与某组分1的___。
A. 调整保留值之比 C. 保留时间之比 B. 死时间之比 D. 保留体积之比
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下列哪项数值反映了组分通过色谱 柱所需的时间?
2
Байду номын сангаас
色谱法chromatography
采用多级化、层析化的高效分离技术。 它不仅是复杂混合物的多组分分离技术。 也是分离分析一体化技术，实现多组分 测定的现代仪器分析方法。 色谱分析法，你了解多少？
3
色谱分析法概论
★ 色谱历史 ★ 色谱法定义 ★ 色谱图与色谱参数 ★ 色谱法分类 ★ 色谱分析的特点 ★ 色谱法发展趋势
1941年，Martin和Synge提出分配色谱法
1944年，Martin等又提出纸色谱法
1952年，Martin和James发明了气液色谱法
1955年，第一台商品气相色谱问世，标志着现
代色谱分析的建立
7
1957年，戈雷(Golay)发表“涂壁毛细管气液
分配色谱理论和实践”论文，首先提出毛细管
速率方程，并第一次实现了毛细管气相色谱分 离。 1958年，Stein和Moore研制出氨基酸分析仪， 确定了核糖核酸的分子结构 1967年，Horvvath和Huber等研制了高效液 相色谱仪 1975年，Small等提出离子色谱
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色谱图及常用术语
important
（一 ）典型色谱流出曲线
色谱图（色谱流出曲线）
由检测器输出的电信号强度 对时间（t）或流动相体积（V） 作图所得到的曲线。
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电 信 号 (mV) (mA)
tR
VM tM
VR tR ′ VR′
curve
h W1/2 Wb
进样
时间（t） 体积（V）
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1. 基线：实验条件下，只有纯流动相通过 检测器时所得到的流出曲线。
4
色谱历史 一、色谱法的由来 1906年，俄国植物学家Tsweet，应用吸 附原理分离植物色素。
5
植物色素的分离 石油醚
（流动相）
ylsfl
组分1+2
碳酸钙
（固定相）
组分2
组分1
6
二、色谱法的发展
1903（1906）年，Michael Tswett提出色谱
法
1931年，Kuhn采用柱色谱分离了类胡萝卜素
噪声：由于各种偶然因素，如固定液
挥发、外界电信号干扰等引起 的基线起伏。 2. 峰高 h : 从峰顶点到基线距离。
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3.区域宽度 1） 峰宽 Wb ： 2）半高峰宽W1/2: 0.5h对应的峰宽 3）标准偏差σ : 0.607h对应峰宽的一半 4）峰面积A A=1.065 h W1/2
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4. 保留值 色谱峰在色谱图中的位置
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20世纪80年代，超临界色谱
20世纪90年代，毛细管电泳（1809年
Reŭss第一次电泳实验） 21世纪，联用技术、大分子色谱分离、制备
色谱可望取得更大的发展
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现在：一种重要的分离、分析技术 分离混合物各组分并加以分析
固定相：固体，液体
流动相：气体，液体，超临界流体 色谱柱：各种材质和尺寸
被分离组分：不再仅局限于有色物质
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分配系数是广义的，包括溶解、吸附、离子交 换、亲和力和分子体积等分离特性。 物质能否分离取决于它们之间是否存在分配
差异，这是一切分离的必要条件，色谱也不
能例外。 与其它分离法相比，色谱法的高效率在于独 它大大扩大了原来分配系数的差异，从而实 现混合物的分离。
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特的“动态分离过程” ，即反复多次分配，
色谱法作用：
色谱分析法是一种十分重要和应用广泛的 仪器分析方法。它采用色谱分离和连续测 定方式相结合方式，实现了对复杂体系中 的多组分（包括价态、性质相近的元素或 化合物）分析。
色谱分析法的关键是实现分离分析 系统化/一体化。
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色谱过程中，流动相/固定相对物质起着下列哪 种作用？
A．运输作用 B．滞留作用 C．化学反应作用 D．分解作用
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（3） 调整保留时间 t R′
t R′ = t R – t M 实质：组分在固定相中滞留的时间
在实验条件一定时，只取决于组分的性质。
V = t ·F （F：流动相流速, ml/min）
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（4）相对保留值 ri,s - - 选择性参数
ri, s
t R (i ) t R (s)
(i ) VR V (s) R
对于分离性质差异小或多组分混合物 分离怎么办？
能否利用分离提供的信息直接进行分
析呢？
1
手性药物酮洛芬(风湿病治疗药物)的拆分
S-(+)-酮洛芬具有药理活性 运动员尿检阳性的判断 尿液中咖啡因含量>12ug/ml 中药有效成分的分离及中药质量控制 空气中芳香烃类物质的测定 苯 0.11mg/m3
甲苯/二甲苯 0.2mg/m3
A.保留时间 B.调整保留时间 C.保留体积 D.调整保留体积
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5. 色谱图的作用 峰的数目 ---含组分的最少个数
色谱峰的保留值（t，v） ---- 定性 峰面积或峰高 峰间距及宽度 -------
定量
色谱柱分离效率（柱效）评价
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（5）分配系数K
------
相平衡参数
在一定温度和压力下，组分在色谱柱 中达分配平衡后，在固定相与流动相 中的浓度比
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色谱法定义 色谱分析基本步聚
进样
选
important
收集
试样
固定相
组分
分析
洗脱
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A+B 流动相
B
B
色谱柱
A
A B A A
溶剂
B
色谱分离过程示意图
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色谱法：
是一种物理分析方法，物质在固定相和
流动相的分配系数有微小差异，当两相
做相对移动时，各组分在两相间进行反 复多次分配，使各组分被流动相运载移 动的速率不同，最终达到相互分离。