氢化可的松
氢化可的松，作为一线抗炎药， 近年来被发现对脑缺血具有保护作用。 有国外研究显示，糖皮质激素可抑制 细胞内iNOS mRNA表达，从而减少NO 的释放。
国内外研究进展
实
验
探究氢化可的松是否通过抑
目
制细胞内iNOS mRNA表达、减少 NO的释放，而发挥对脑缺血的保
的
护作用。
实验目意义
自由基: 外层轨道具有不配对电子的院子、原子团、例子和分子
统称为现自在由，基临。床自由上基已通研常发性质出比多较种活对跃脑，能缺与血多具种有生保物分护子作反应 从用而的改药变物这些，大目分的子是的消理除化性缺质血。期人间体生内的化自紊由乱基、主防要有止超缺氧血阴离 子再（灌O2注—）损、伤羟、自为由基溶（栓OH治—）疗、争烷取自更由多基的、一时氧间化。氮自由基等。
一氧化氮自由基的来源
-------- 一氧化氮合酶途径（NOS）
NOS广泛存在于各种类型的细胞中，它可以催 化L-精氨酸和分子氧化反应生成一氧化氮自由基 （NO）。现已确定NOS亚型有3种，根据原形酶的 组织来源不同分别成为内皮细胞型NOS（eNOS）、 脑神经元型NOS（nNOS）和诱导型NOS（iNOS）， 其中iNOS在缺血、缺氧、细胞损伤和炎性反应的 激活下表达增强，产生释放大量的NO。NO能与 O2—反应生成过氧亚硝酸盐（ONOO—），后者不 稳定，质子化生成过氧亚硝酸盐（ONOOH），再分 解生成OH—和NO2，具有神经毒性。
分为3组：假手术组；缺血组；给药组，
实验材料与方法
2. 实验方法
2.1 模型制备 2.2 存活时间、存活率的测定
将小鼠乙醚吸入全身麻醉后仰背位固定于手术 板上模，型颈制前作去完除成被后毛，、立消即毒开，始皮记肤时正，中记开录口6h，内钝死性亡 的剥动离物颈数总，动计脉算以存及活迷率走，神记经录，死每亡侧动备物线的2根存，活分时别间结。 扎，当第三根线结扎完时开始计时，然后在两根线 中间将颈总动脉剪断，缝合切口，假手术组只剥离 颈总动脉不接扎。手术结束后迅速松开小鼠。
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创意
新义
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点
血缺保血护的作机用制的，新为机研制究！新药提 供新思路。
实验材料与方法
1. 实验材料
1.1 药品与试剂 氢化可的松、MDA试剂盒、Griess试剂盒
1板.2上主，要颈仪前器去设除备被毛、消毒，皮肤正中开口，钝性 剥离分颈光总光动度计脉、以组及织迷匀走浆神器经、，2每ml侧E备P管线、2根37，度分孵别箱结 1扎中.3间，动将当物颈第及总三分动根组脉线剪结断扎完，时缝开合始切计口时，，假手然术后组在只两剥根离线 颈总健动康脉雄不性接成扎年。小手鼠术20结只束，后体迅重速28松~3开2g小鼠。
2.4 统计分析 2.3 大脑内NO和丙二醛MDA含量测定 试SHo剂PmSo盒用S存g1e测G活n3r定e.i时ie0脑ts间ys内统试和o丙f计剂M二Dv盒学Aa醛含r测软i浓量a定件n度数c小e，。据鼠t通以e大s过xt脑±判单内S断因ENM方O素浓表差度方示是，差，否用分应齐M析用性DA， 方差齐性采用LSD 检验，方差非齐性采用 Dunnett’s T3检验，比较各组间的显著性差异， P<0.05 有统计学意义。存活率通过χ2-test 比较 各组间显著性差异，P<0.05 有统计学意义。
范姝 琳
范谢姝 琳佳男
范佩
指导教师：纪影实
氢化可的松通过抑制
指氧护作化导用应教的激研而师究发：。挥脑纪缺影血保实
脑缺血
脑缺血是大脑血液供应不足时出现的一种症状。 脑缺血时，可引起大脑的一系列生理变化，如：线粒 体能量代谢障碍、神经递质失调、钙超载和酸碱平衡
问题4：脑组织匀浆稀释后体积较大，由于实验条件所
限无法盛装。 解决方法：选取夹闭颈总动脉影响较大的组织——海马 来做以测量。
展望
深入探求糖皮质激素调节iNOS的机制；
探求糖皮质激素对海马起到保护作用后，对学习 记忆的影响；
探求不影响糖皮质激素抑制NO的途径并能对糖皮 质激素的副作用有遏制作用的药物，从而为联合 用药提供新的思路。
预期结果
1.模型组NO浓度、MDA含量均高于假手术组，生 存时间低于假手术组； 2.给药组NO浓度、MDA含量均低于模型组，且生 存时间长于模型组；
此预期结果可证实：氢化可的松预处理成年小
鼠，可减少NO的合成，减少脑组织自由基，降低 氧化应激损伤，从而对脑缺血起到保护作用。
研究中可能出现的情况、问题及解决办法
参考文献
[1] Dexamethasone pre-treatment protects brain against hypoxic-ischemic injury partially through up-regulation of vascular endothelial growth factor A in neonatal rats Y. Feng, P.G. Rhodes, A.J. Bhatt Neuroscience Volume 179, 14 April 2011, Pages 223–232. [2] Amino Acids. 2011 Oct 14. Post-transcriptional divergence in the regulation of CAT-2A, CAT-2B and iNOS expression by dexamethasone in vascular smooth muscle cells.Thakur S, Baydoun AR. [3] BMC Neurosci. 2011 May 26;12:49.Dexamethasone inhibits the Nox-dependent ROS production via suppression of MKP-1-dependent MAPK pathways in activated microglia.Huo Y, Rangarajan P, Ling EA, Dheen ST. [4] Shock. 2010 Jan;33(1):64-9.Dexamethasone inhibits the induction of iNOS gene expression through destabilization of its mRNA in proinflammatory cytokinestimulated hepatocytes.Ozaki T, Habara K, Matsui K, Kaibori M, Kwon AH, Ito S, Nishizawa M, Okumura T. [5] 周伟,吴圣楣,陈惠金.地塞米松对缺氧缺血新生大鼠脑内诱生型一氧化氮合酶基因表 达的调节[J].中华围产医学杂志，2000，3(2)：123-126. [6] 王晓娟,余华峰.自由基与脑缺血再灌注损伤.国外医学·老年医学分册,2011,22(1)： 17-19. [7] 王宝宏,马莲美,孙允宵,王建勇.地塞米松预处理对新生鼠缺氧缺血脑损伤的保护作 用[J].中国儿童保健杂志,2008,16(2):185-187. [8] 余兵,何权瀛,等.糖皮质激素及茶碱对哮喘小鼠气道炎症与肺内一氧化氮抑制作用的 研究[J].中华结核和呼吸杂志,1998,21(11):664-667.
实验材料与方法
2. 实验方法
22..32大存脑活内时N间O和、丙存二活醛率M的DA测含定量测定 用Griess试剂盒测定小鼠大脑内NO浓度，用MDA
试剂盒模测型定制脑作内完丙成二后醛，浓立度即。开始记时，记录6 h内死 亡的动物数，计算存活率，记录死亡动物的存活时间。
实验材料与方法
2. 实验方法
研究背景 紊乱等。这些生理变化都将使脑受到严重的损伤，而
引起神经系统功能障碍。
现在，临床上已研发出多种对脑缺血具有保护作 用的药物，目的是消除缺血期间生化紊乱、防止缺血 再灌注损伤、为溶栓治疗争取更多的时间。
脑缺血损伤机制
脑缺血 脑脑缺缺血血是损大伤脑的血机液制供十应分不复足杂时，出有现多的种一因种素症参状与。， 脑诸缺如血钙时超，载可、引兴起奋大性脑氨的基一酸系毒列性生作理用变、化氧，自如由：基线的粒毒 体性能作量用代等谢。障随碍着、对神自经由递基质研失究调的、深钙入超，载人和们酸逐碱渐平证衡实 研究背景 紊自乱由等基。连这锁些反生应理是变脑化缺都血将的使核脑心受病到理严环重节的。损伤，而 引起神经系统功能障碍。
1.2 主要仪器设备 分光光度计、组织匀浆器、2ml EP管、37度孵箱
1.3 动物及分组 健康雄性成年小鼠20只，体重28~32g
分为3组：假手术组；缺血组；给药组，
实验材料与方法
12.. 实实验验材方料法
12..11药模品型与制试备剂 氢化可的松、MDA试剂盒、Griess试剂盒 将小鼠乙醚吸入全身麻醉后仰背位固定于手术
问题1：双侧颈总动脉夹闭后，小鼠存活时间较长，实
验进程进行较慢。 解决方法：进行预实验，提高操作熟练程度，减少手术 时间。
问题2：在实验中，如何降低组织NO浓度的损失。
解决方法：小鼠死亡后，迅速将脑组织取出，放入冰盒 中，迅速匀浆测定，防止NO损失。
问题3：理想判断死亡的指标是脑电的停止，但条件不
能满足。 解决方法：用呼吸和心率来间接作为测量指标。