四、操作步骤
1. 配制培养基 2. 制作糖浸片
将圆形打孔器 (d=0.8 cm) 打下的滤纸片 , 置入不同糖的饱和溶液 中浸泡 10 min后 , 取出置 28℃培养箱中烘干备用 (最好置紫外灯 下灭菌 20 ～ 30min)。
在已培养 24h的大肠杆菌 (E.coli) 等 3种斜面内分别倒入5ml无菌 水，用接种环轻轻刮下菌苔，振荡，制成菌悬液。
实验安排及分组情况

第一次课（第四周）：
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讲述实验内容， 完成实验步骤1：配培养基，灭菌 完成实验步骤2、3、4、5、6等 撰写实验报告

第二次课（第六周）：
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分组
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4个人一组，分成6组，每组作两种制平板方式。
注意事项

1.做实验之前要想好要准备哪些东西，准备多少；灭 菌时要想好要灭哪些东西，要灭多少。


2.要严格无菌操作。
3.加入菌悬液后要趁培养基尚未凝固及时倒平板，否 则将会出现平板尚未倒好培养基已经凝固于三角瓶中。

4.放滤纸片时要对号入座并轻轻按压 , 以免在进行倒 置培养时糖片脱离培养基平板，也可防止交叉污染。
附录：合成培养基
1.成分：磷酸铵 1g KCl 0.2g 硫酸镁 0.2g 豆芽汁 10ml 琼脂 20g 蒸馏水 1000ml pH 7.0 加12ml 0.04%的溴甲酚紫(pH 5.2-6.8），颜色由黄变紫，作为指示 剂)。121OC灭菌20min。

3. 制备菌悬液

4. 制平板


混菌法——在无菌平板内加入上述菌悬液(1ml菌悬液/10ml培养 基），倒入溶化冷却至50OC左右的合成培养基，轻轻摇匀。
涂布法——将溶化冷却至50OC左右的合成培养基倒入无菌培养皿， 待其凝固后，加入0.5ml菌悬液，用玻棒涂布均匀。
对照：培养基+菌0+糖0（1） 处理： – 培养基+菌+糖（3混菌，3涂布） – 培养基+菌+糖0（3，混菌或涂布） – 培养基+菌0+糖（1）
微生物生理学实验
生科楼C5029 双周二，下午，2：00～ 主讲教师：
博士 教学辅助研究生： – 任改弟，陈兆进
–何琳燕
实验一 用生长谱法测定微生物的营养要 求
一、目的要求

学习并掌握生长谱法测定微生物营养需 求的基本原理和方法。
二、基本原理

微生物的生长繁殖需要适宜的营养环境； 在缺乏某种营养物质的、含有指示剂的培养基上接入 某种微生物，再在接菌平板上置入这种营养物质，经 一定条件培养后 , 即可通过指示剂变化情况来判断 对不同营养物质的利用情况。
6. 培养及观察
– 将已放置糖浸片后的平皿置于37℃条件下 , 培养 18 ～ 24 h后 , 观察滤纸片周围有无菌落生长以及 指示剂变色程度。
五、实验报告
1.
2.
结果 – 绘图，表示大肠杆菌等三种菌在平板上 的生长状况。 分析 绘制表格，说明大肠杆菌等三种菌利用 六种糖的情况。 如何保证实验结果的准确性？

四、操作步骤
5. 分小区植糖
– 在冷凝后的平皿背面 , 用记号笔画出 6个均匀的 植糖区域 (图1) , 用无菌镊子分别取代号为 A、B、 C、D、E、F的 6种糖浸片各 1张对号放入用两种 方法接菌的平板的对应区域中 , 并轻轻按压 , 以 免在进行倒置培养时糖片脱离培养基平板。
图1
ห้องสมุดไป่ตู้
平板分区示意图

该法可以定性、定量地测定微生物对各种营养物质的 要求，在微生物育种、营养缺陷型鉴定以及饮食制品 质量检测等诸多方面具有重要用途。
三、实验器材




菌种 – 大肠杆菌 (Escherichia coli) 、 – 枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)、 – 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) 培养基（ 合成培养基） – (NH4 )3 PO4 1 g, KCl 0.2 g, MgSO4 · 2O 0.2 g, 豆芽 7H 汁 10 mL, 琼脂 20 g, 蒸馏水定容至 1L pH 7.05,加入 12mL 0.04%的溴甲酚紫作指示剂 (pH5.2～6.8) , 将颜色 由黄色调为紫色。1 ×105 Pa灭菌 25 min。 溶液和试剂 – A—葡萄糖、B—乳糖、C—麦芽糖、D—蔗糖、E—木 糖、F—半乳糖。 器具 – 无菌培养皿、吸管、镊子、牙签、酒精灯、接种环等 , 另备试管无菌水 6支。