操作方法
取2个光程为1厘米的带盖石英比色杯，分别加入25℃予
热过的2.8ml底物溶液。向一只比色杯中加入0.2ml 0.001mol/L HCl，作为空白，校正仪器的253nm处光吸收零点。再在另一 比色杯中加入0.2ml待测酶液，立即混匀并记时，每半分钟读 数一次，共读3~4分钟。 绘制酶促反应动力学曲线，从曲线上求出反应起始点吸 光度随时间的变化率（即初速度）A253/min。
国际系统分类
酶原与酶原激活 无活性的酶前身物称酶原。由无活性酶原 转变为有活性酶的过程称酶原激活。 同工酶 分子结构不同、理化性质也不同，但催化同一化学 反应的一组酶，如乳酸脱氢酶（LDH）。 别位酶 多亚基组成，其中有催化亚基、有调节亚基，小分
子化合物结合调节亚基后分子构象改变，引起催化活性改变。
五、酶的活力测定
酶活力（enzyme activity），是指酶催化一定化学反 应的能力。 酶活力单位（国际单位） 标准状态下，每分钟使一微克 分子作用物发生转变的酶量。人们普遍 采用是习惯用法，如 a-淀粉酶，可用每小时催化1克可溶性淀粉所需要的酶量来表 示。
胰蛋白酶活力单位的定义规定为：以 BAEE 为底物反应液 pH8.0 ，
25℃，反应体积 3.0ml ，光径 1 厘米的条件下，测定 A253 ，每分 钟使A253增加0.001，反应液中所加入的酶量为一BAEE单位。
酶活力与ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ反应速度
初速度 研究酶反应的动力学以酶促反应的初速度为准
18 16 14 12 10 8 6 4 2 0 0 5 10 时间 15 20
用于判断和确定酶活型中心的主要方法：
1、专一性研究 通过研究酶的专一性底物的结构特点，来判断 和确定活性中心的结构特点。
2、酶侧链基团的化学修饰法 酶分子中可以被化学修饰的基团 很多，如巯基、羟基、咪唑基、氨基及羧基
等。
四、酶的命名与分类 习惯命名法
按催化反应类型分类 脱氢酶、脱羧酶、连接酶、聚合酶等。 按组织来源及性质分类 胃蛋白酶/胰蛋白酶，酸性/碱性磷酸 酶等。
产物量
系列1
时间
以N- 苯甲酰 -L—精氨酸乙酯为底物，用紫外吸收法进 行测定的原理是：N－苯甲酰－L—精氨酸乙酯英文缩 写为BAEE）在波长253nm下的紫外吸收远远弱于苯甲 酰L—精氨酸（英文缩写为 BA ）。在胰蛋白酶的催化 下，随着酯键的水解，苯甲酰L—精氨酸逐渐增多，反 应体系的紫外吸收宜随之相应增加。
酶蛋白 决定反应特异性（专一性）。
一种辅助因子可与多种酶蛋白结合；一种酶蛋白只能与一种 辅助因子结合。
三、酶的活性中心
必需基团 酶分子中与催化作用直接相关、不可缺少的化学 基团。 活性中心 酶分子中必需基团相对集中，构成一定空间结构 区域，与催化作用直接相关。 结合部位 （底物） 活性中心 催化部位（底物的键在此处被打断或形成新 的键）
胰蛋白酶的活力的测定
一、酶的化学本质
概念 是一类生物催化剂。 化学本质 绝大多数酶是蛋白质，某些 RNA 或 DNA 也具 有催化活性。
二、酶的化学组成
单纯蛋白质的酶 蛋白质的酶 全酶
酶蛋白apoenzyme
辅助因子cofactor
辅助因子 辅基/辅酶—小分子有机化合物、金属离子，直接参 加反应。直接对电子、原子或某些化学集团起传递作用。
每分钟A253nm增加值
样品胰蛋白酶BAEE活性单位＝
0.001