一、基础题点练1．(2019·徐州模拟)已知限制性内切酶Xma Ⅰ和Sma Ⅰ的识别序列分别为C ↓CCGGG 和CCC ↓GGG 。

有关这两种酶及应用的叙述，错误的是( )A ．这两种酶作用的底物都是双链DNAB ．DNA 中出现这两种酶识别序列的几率不同C ．Xma Ⅰ切割DNA 形成的黏性末端是—GGCCD ．使用这两种酶时需注意控制反应温度、时间等解析：选B 限制酶作用的底物是双链DNA 分子；这两种限制酶作用的核苷酸序列相同，所以这两种识别序列在DNA 中出现的的几率相同；根据碱基互补配对原则，CCCGGG 的互补链是GGGCCC ，并根据Xma Ⅰ的切割位点可知，切割后的黏性末端是—CCGG ；温度能影响酶的活性，所以使用酶时需要注意控制反应温度和时间等。

2．如图表示的是三种黏性末端，下列说法正确的是( )A ．图中所示黏性末端是由同种限制酶切割形成B ．若图甲中的G 碱基处发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点C ．图中所示黏性末端是限制酶断开氢键形成D ．目前常用的运载体有质粒、噬菌体和动植物病毒等几类原核生物解析：选B 产生甲黏性末端的限制酶的识别序列为=====GAA TTC CTTAAG ，产生乙黏性末端的限制酶的识别序列为=====CAATTG GTTAAC ，产生丙黏性末端的限制酶的识别序列为=====CTTAAG GAA TTC ，可见甲、乙、丙黏性末端是由3种限制酶作用产生的；限制酶具有专一性，能够识别双链DNA 分子的某种特定核苷酸序列，如果甲中的G 发生突变，限制酶可能无法识别该切割位点；图中所示黏性末端是限制酶断开磷酸二酯键形成的；质粒是环状DNA 分子，噬菌体和动植物病毒都没有细胞结构，它们都不属于原核生物。

3．下列关于蛋白质工程的叙述，错误的是( )A ．蛋白质工程的基础是基因工程B ．蛋白质工程遵循的原理包括中心法则C ．蛋白质工程是在分子水平上对蛋白质分子直接进行操作，定向改变分子的结构D ．蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子解析：选C 蛋白质工程是通过基因修饰或基因合成对现有蛋白质进行改造，或合成新的蛋白质，故蛋白质工程的基础是基因工程；蛋白质工程遵循的原理包括中心法则；蛋白质工程是通过改造基因来实现对蛋白质分子的改造的；蛋白质工程能产生出自然界中不曾存在过的新型蛋白质分子。

4．(2019·南通模拟)下列关于“DNA 的粗提取与鉴定”实验的叙述，错误的是( )A ．鸡的红细胞和菜花均可作为提取DNA 的材料，处理方法有所不同B ．在切碎的菜花中加入一定量的洗涤剂和食盐，充分研磨，过滤收集滤液C．将NaCl溶液浓度调至2 mol/L，用单层滤纸过滤获取析出物D．利用某些蛋白质在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提纯DNA解析：选C鸡的红细胞和菜花均可作为提取DNA的材料，处理方法有所不同，动物细胞只要加蒸馏水使细胞吸水破裂，植物细胞需要加洗涤剂和食盐研磨；在切碎的菜花中加入一定量的洗涤剂和食盐，充分研磨，过滤收集滤液；将NaCl溶液浓度调至2 mol/L，用多层纱布过滤获取滤液；利用某些蛋白质在酒精中的溶解度大于DNA在酒精中的溶解度的原理，可以提纯DNA。

5．下列是利用肝脏细胞粗提取DNA实验的两个关键操作步骤，相关叙述错误的是()B．步骤1中，冰浴处理的主要原理是低温下DNA水解酶容易变性C．步骤2中，异戊醇的作用可能是使与DNA结合的蛋白质因变性而沉淀D．步骤2中，离心后应取上清液，因为DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比较大解析：选B步骤1中，加入柠檬酸钠缓冲液的目的是维持pH的稳定；低温不会使酶变性失活，只能降低酶的活性；步骤2中，DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比较大，因此异戊醇的作用可能是使与DNA结合的蛋白质因变性而沉淀；步骤2中，离心后应取上清液，因为DNA在2 mol/L NaCl溶液中溶解度比较大。

6．限制酶MunⅠ和限制酶Eco RⅠ的识别序列及其切割位点分别如下：—C↓AATTG—和—G↓AA TTC—如图表示某一目的基因片段与质粒拼接形成重组质粒的过程，相关叙述错误的是()A．用限制酶Eco RⅠ切割目的基因，同时用限制酶MunⅠ切割质粒B．两种限制酶切割后形成的黏性末端的碱基可以互补配对C．限制酶能使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开D．将重组质粒同时用2种限制酶切割则会形成2种DNA片段解析：选D由图可知，目的基因两侧都是限制酶Eco RⅠ的切割位点，因此应选用限制酶Eco RⅠ切割含有目的基因的外源DNA分子，质粒中含有限制酶MunⅠ和限制酶Eco RⅠ的切割位点，但Eco RⅠ的切割位点位于标记基因中，用其切割会破坏标记基因，因此为保证重组质粒表达载体的准确构建，应选用限制酶MunⅠ切割质粒；图中两种限制酶切割后形成的黏性末端的碱基可以互补配对；限制酶的作用是使特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开；将重组质粒同时用2种限制酶切割则会形成3种DNA片二、高考题型练7．(2019·成都模拟)如图1所示为用PvuⅠ限制酶切下的某目的基因及其上DNA片段示意图；图2所示为三种质粒示意图。

图中Ap为氨苄青霉素抗性基因，Tc为四环素抗性基因。

Eco RⅠ、PvuⅠ等为限制酶及其切割的位点。

复制原点是在基因组上复制起始的一段序列，是指质粒在受体细胞中复制时的起点。

(1)组成片段D的基本骨架与细胞膜的基本骨架相同的元素是____________。

(2)图2中质粒A、质粒C能否作为目的基因运载体最理想的质粒？________(填“能”或“否”)，请说明理由________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________。

(3)重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅为10－7，用质粒B构建重组质粒，为了筛选出导入了重组质粒的大肠杆菌，在导入完成后，将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是__________________________________________________，可能性最大的是________________________________________________。

(4)若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需要将重组质粒导入至山羊的________(细胞)中。

解析：(1)脱氧核糖和磷酸交替连接构成DNA片段D的基本骨架，脱氧核糖由C、H、O三种元素组成，组成磷酸的元素是H、P、O；磷脂双分子层构成细胞膜的基本骨架，磷脂分子是由C、H、O、N、P 组成，可见组成片段D的基本骨架与细胞膜的基本骨架相同的元素是C、H、O、P。

(2)分析图2可知：质粒A缺少标记基因，质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，进而影响重组质粒的自主复制，所以质粒A、质粒C均不能作为目的基因运载体最理想的质粒。

(3)用质粒B构建重组质粒，当用和目的基因相同的限制酶(PvuⅠ)切割时，Tc(四环素抗性基因)遭到破坏，而Ap(氨苄青霉素抗性基因)结构完好，因此在重组质粒导入完成后，将所有大肠杆菌分别在含有四环素和氨苄青霉素的培养基中培养，大肠杆菌在两种培养基的生长状况不可能的是在含四环素的培养基上能正常生长，在含氨苄青霉素的培养基上不能正常生长。

因重组质粒成功导入受体细胞的概率一般仅为10－7，所以可能性最大的是在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都不能正常生长。

(4)若想在山羊的乳汁中收获上述目的基因的表达产物，则需要将重组质粒导入山羊的受精卵中。

答案：(1)C、H、O、P(2)否质粒A缺少标记基因，质粒C在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被限制酶切割，会影响重组质粒的自主复制(3)在含四环素的培养基上能正常生长，在含氨苄青霉素的培养基上不能正常生长在含氨苄青霉素的培养基和含四环素的培养基上都不能正常生长(4)8．水稻是一种重要的粮食作物，选育高抗性良种是有效防治病虫危害、增加水稻单位面积产量的关键措施。

转基因技术为得到抗病虫水稻种子开辟了一条新路。

下面是水稻某抗性基因获得的过程。

据图回答下面的问题：(1)cDNA文库中的基因在基因组文库中____________。

(填“都有”“都没有”或“有一部分”)。

(2)B过程需要的酶________(填“存在”或“不存在”)于正常真核生物体内，图示中含目的基因的细胞群________(填“是”或“不是”)水稻的体细胞。

(3)如果不建基因文库，但需要大量的目的基因Ⅰ和Ⅱ，可分别利用图中________和________为模板直接进行PCR扩增。

进行扩增时所使用酶的显著特点是__________。

(4)抗性基因导入受体细胞后，仅一条染色体含抗性基因，该基因的传递________(填“遵循”或“不遵循”)孟德尔分离定律，试说明判断依据：________________________________________________________________________________________________________________________________________________。

解析：(1)cDNA文库是部分基因文库，基因组文库是全部基因文库，所以cDNA文库中的基因在基因组文库中都有。

(2)B过程是由mRNA获取cDNA的过程，需要逆转录酶的催化，逆转录酶在正常真核细胞中不存在，图示中含目的基因的细胞群不是水稻的体细胞。

(3)如果不建基因文库，但需要大量的目的基因Ⅰ和Ⅱ，可分别利用图中DNA和cDNA为模板直接进行PCR扩增。

进行扩增时所使用酶的显著特点是耐高温。

(4)抗性基因导入受体细胞后，仅一条染色体含抗性基因，该基因的传递遵循孟德尔分离定律，因为仅一条染色体含抗性基因，另一条没有其等位基因，相当于杂合子。

答案：(1)都有(2)不存在不是(3)DNA cDNA耐高温(4)遵循仅一条染色体含抗性基因，另一条没有其等位基因9．(2019·太原模拟)为增加菊花的花色类型，研究者从其他植物的cDNA文库中提取出花色基因C(图1)，拟将其与质粒(图2)重组，再借助农杆菌导入菊花细胞中。

图3表示Eco RⅠ、Bam HⅠ和Sau3AⅠ三种限制酶的识别序列与切割位点。

请分析回答：(1)利用PCR技术扩增目的基因C的原理是__________。