NANCHANG UNIVERSITY功能食品学综述论文学院:生命科学与食品工程学院专业:食品科学与工程班级:学号:学生姓名:廖杰指导教师:王远兴起讫日期:2014年 3月至 2014年 4月大豆异黄酮的测定方法摘要本文在参考国内外大量文献的基础上,对大豆异黄酮的测定方法进行了系统的总结和介绍关键词:大豆异黄酮;测定方法Abstract:In reference on the basis of a large number of literature at home and abroad, this paper method of the determination of soybean isoflavones were summarized and introducedKeywords:soy isoflavones method目录摘要 ........................................................................................................................................... .. (I)Abstract:................................................................................................................................. .............. I 目录 ........................................................................................................................................... .......... II 1根据紫外吸收特性检测方法 ......................................................................................................... 1 1.1紫外分光光度法(UV .. (1)1.2三波长法(three–wave length UVspectrophotometry (1)2根据色谱原理检测方法 ................................................................................................................. 2 2.1高效液相色谱法(HPLC ................................................................................................. 2 2.2高效液相色谱―质谱法(HPLC–MS .............................................................................. 2 2.3气相色谱法(GC ............................................................................................................. 2 2.4气相色谱―质谱法(GC–MS .. (3)2.5毛细管电泳法(CE .........................................................................................................3 2.6薄层扫描色谱法(TLCS .................................................................................................. 3 2.7四标样快速测定法 . (3)2.8双向纸层析色谱法(Two–dimensional paperchromatography (4)3根据医学免疫检测方法 ................................................................................................................. 4 3.1时间分辨荧光免疫分析法(TR–FIA .............................................................................. 4 3.2酶联免疫吸附法(ELISA . (4)3.3放射免疫测定法 (5)4各检测方法系统归纳和分析 ......................................................................................................... 5附:各国际组织采用的检测方法及标准 ........................................................................................ 6参考文献 ........................................................................................................................................... .. 7大豆异黄酮 (Soybean isoflavones , ISO 是一种从大豆中分离提取活性成分, 具有异黄酮类化合物典型结构, 包括三种游离型异黄酮苷元和九种结合型大豆异黄酮。
根据大豆异黄酮分子结构, 可用特征显色及荧光反应对其定性定量检测。
目前主要检测方法有:利用紫外吸收特征,可采用紫外分光光度法(UV 、三波长法等进行大豆异黄酮定量检测; 利用色谱原理检测大豆异黄酮方法为:高效液相色谱法(HPLC 、高效液相色谱―质谱法(HPLC – MS 、气相色谱法(GC 、气相色谱―质谱法(GC – MS 、毛细管电泳法(CE 、四标样快速测定法、薄层扫描色谱法(TLCS 、双向纸层析色谱法等。
此外,医学上荧光免疫法:分辨荧光免疫分析法(TR – FIA 和酶联免疫吸附法(ELISA 等也是检测大豆异黄酮重要方法。
至今我国尚未制定统–标准规范 ISO 检测方法, 现对大豆异黄酮测定多采用 HPLC 法或气相色谱―质谱(GC – MS 联用法,且毛细管电泳法 (CE 将逐渐成为替代 HPLC 方法, 广泛应用于大豆异黄酮主要组分(大豆苷元和染料木素等测定。
本文根据检测大豆异黄酮原理不同, 暂归纳为三大类进行阐释,并对各种检测大豆异黄酮方法进行系统比较分析 1根据紫外吸收特性检测方法1.1紫外分光光度法(UV大豆异黄酮结构中羟基和芳香环形成共轭体系具有较强紫外光吸收特性, 大豆异黄酮各组分最大吸收波长相差不大, 峰数目较少。
如染料木素在紫外区有很强吸收带, 最大吸收波长为 260nm ; 大豆苷元最大吸收波长为 256nm , 在 310 nm 处有–个很小肩峰,这使紫外吸收作为评价指标成为可能。
王哲等〔 1〕用紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量, 以大豆苷元作标准品绘制标准曲线, 建立回归方程,相关系数 R2=0.9941、方法回收率 100.4%、变异系数 0.25%,证明此法可靠性好、回收率高、重现性高。
1.2三波长法(three – wave length UV spectrophotometry三波长法于 1980年–经提出, 便很快在岛津 UV – 250分光光度计上被采用, 形成–种新方法。
该法原理为:根据大豆异黄酮在 240nm 、 260nm 、 280nm 三个波长处吸光值,分别计算△ A ,计算方法为:△ A=A260-(A240+A280 /2。
根据三角形相似原理推得△ A 与待测物浓度成正比, 进而求得待测物质浓度。
鞠兴荣等〔 2〕采用三波长紫外分光光度法测定大豆异黄酮含量,有效消除随浓度不同发生本底漂移、油脂等干扰物质、及吸收峰不对称给定量分析造成不良影响。
此法简便、灵敏,最低检出浓度为1μg/mL,加样回收率>99%;证明该法具有良好准确性和精密度,适于大批量样品测定和产品生产质量控制及监测。
2根据色谱原理检测方法2.1高效液相色谱法(HPLC高效液相色谱法是在经典色谱法基础上, 于上世纪 60年代后期引用气相色谱理论所建立检测方法, 可广泛应用于大豆异黄酮检测。
在技术上, 色谱柱是以特殊方法用小粒径且均匀填料填充而成, 小颗粒具有高柱效, 从而使柱效大大高于经典液相色谱(每米塔板数可达几万或几十万 ,但会对仪器产生高阻力,为此,流动相改为高压输送(最高输送压力可达 4.9×107Pa ;同时,柱后联有高灵敏度检测器, 可对流出物进行连续检测。
与 HPLC 配备的检测大豆异黄酮仪器主要是紫外分光光度仪(UV 和质谱分析仪(MS 。
建立高效液相色谱法 (HPLC 测定保健食品中大豆异黄酮含量方法。
运用二极管阵列检测器(PDA 建立 4种大豆异黄酮组分:染料木素、大豆苷元、黄豆黄素和黄豆苷光谱库, 采用 PDA 检测, C18反相柱, 以甲醇∶水∶醋酸 (HAC =55∶ 45∶1(V/V/V为流动相,测定 4种大豆异黄酮组分响应值之比。
该法变异系数小于 5%,回收率在 92.5%~99.3%之间,检测速度快,精密度及准确度在允许范围内,可作为测定保健食品中大豆异黄酮方法。
超声波辅助提取(UAE 可提高有机化合物提取有效率,徐颖〔 3〕采用高效液相色谱法结合具有提取时间短和工艺简化等优点超声提取法测定异黄酮含量。
吴周和等〔 4〕建立反相高效液相色谱法测定豆制品中大豆苷元和染料木素方法,采用Hypersil BDS C18(250mm ×4.6mm ID , 5μm 色谱柱,以甲醇、 0.5%乙酸水溶液为流动相, 流速为 1ml/min, 柱温为 35℃, 检测波长为 260nm ; 样品制备经真空干燥、正己烷脱脂、 80%甲醇加热提取、离心、过滤等过程, 大豆苷元和染料木素加样回收率分别为 99.1%和 98.8%, RSD 分别为 1.3%和 0.5%。