第四章 中药的含量测定
1
第一节 含量测定的目的与意义
• 中药的含量测定与化药有很大区别 • 中药组成复杂，产生疗效的不是某单一成分，检测任
何一种活性成分均不能反映中药的整体疗效。 • 但是借鉴化药质量控制模式，测定某一味药味的有效
成分、活性成分、指标性成分的含量的方法，对于控 制中药质量起着不可替代的重要作用。 • 通过测定中药中有效成分、毒性成分或某些指标性成 分的含量来衡量其制剂工艺的稳定性和中药材的质量 优劣，以保证中药的质量，达到临床用药安全、有效 的目的。
（2）硝酸—硫酸法 该法适用于大多数有机物质的破坏，无 机金属离子均氧化成高价态，与硫酸形成不溶性硫酸盐的金属 离子的测定，不宜采有此法。
15
第二节 含量测定样品的处理
（3）硫酸—硫酸盐法
本法所用硫酸盐为硫酸钾或无水硫酸纳，加入 硫酸盐的目的是为了提高硫酸的沸点，以使样品破 坏加速完全。同时防止硫酸在加热过程中过早地分 解为SO3而损失。经本法破坏所得金属离子，多为 低价态。本法常用于含砷或锑的有机样品的破坏， 破坏后得到三价砷或锑。
应用本法时要注意以下几个问题： 1）加热灼烧时，控制温度在420℃以下，以免某些被测金属 化合物的挥发。 2）灰化完全与否，直接影响测定结果的准确度。如欲检查 灰化是否完全，可将灰分放冷后，加入稍过量的稀HCl-水（1:3） 或硝酸-水（1:3）溶液，振摇。若呈色或有不溶有机物，可于 水浴上将溶液蒸干，并用小火炭化后，再行灼烧。 3）经本法破坏后，所得灰分往往不易溶解，但此时切勿弃 去。
常见的提取方法：
冷浸法 回流提取法 连续回流提取法 超声提取法 超临界流体提取法
5
第二节 含量测定样品的处理
三、样品的分离净化 （一）沉淀法 （二）蒸馏法 （三）液一液萃取法（LLE） （四）色谱法
6
第二节 含量测定样品的处理
（四）色谱法
吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和凝胶色谱皆可作为中药 制剂分析中的净化分离方法，其操作方式有柱色谱，薄层色谱和 纸色谱。
17
第三节 常用定量分析方法
分类重量分析和滴定分析。 化学分析法所用仪器简单，结果准确。 主要用于测定制剂中含量较高的一些成分及 含矿物药制剂中的无机成分，如总生物碱类、总 酸类、总皂苷及矿物药制剂等。 化学分析法有一定的局限性，其灵敏度低， 操作繁琐、耗时长，专属性不高，对于微量成分 准确性不理想。
氧化铝能将黄酮类吸附在柱上，用于生物碱、苷类等的测 定。例如用ＵＶ法（吸收系数法）
硅胶适合于分离中性或酸性化合物，强烈保留碱性化合物。 若把样品提取液加到柱上，依次用极性由小到大的溶剂洗脱， 则可以将杂质和被测成分分离。
8
第二节 含量测定样品的处理
⒉键合相硅胶：
十八烷基键合相硅胶（简称C18或ODS）是常用的固体萃取剂， 其次有烷基、苯基、氰基键合相硅胶，可用来分开脂溶性和水 溶性杂质或成分。也常用于萃取，纯化水基质体液中憎水性药 物。该类LSE的一般操作程序为： 1)柱的活化。用2ml甲醇冲洗以润湿键合相和除去杂质，再用0.5 毫升水洗去柱中的甲醇。 2)上样。 3)清洗。用2～5ml的水清洗以除去弱保留的亲水成分，如无机盐、 氨基酸、亲水的蛋白质、糖以及中等保留成分的极性化合物、 低肽等。 4)洗脱。用2～5ml甲醇或甲醇-水洗脱大分子的肽、甾体、较亲脂 的药物等强保留的待测组分。
不干净等原因而玷污样品， ③ 防止粉尘飞散或挥发性成分的损失。 ④ 过筛时，通不过筛孔的部分颗粒决不能丢弃，必须反复粉碎或
碾磨，让其全部通过筛孔。
4
二、样品的提取
第二节 含量测取粉末适量 精密称定，首先用溶剂进行提取，使被测组分和某些共 存组分从中溶解出来（前者必须完全溶出），与滤渣分 离后，再对被测组分进行含量测定。
19
第三节 常用定量分析方法
（二）滴定分析法 滴定分析法分为酸碱滴定法、沉淀滴定法、配位滴定法和
氧化还原滴定法。 1、酸碱滴定法
适用于测定中药制剂中所含有的生物碱、有机酸、内酯类 等酸、碱组分的含量。
①直接滴定：对于K·C≥10-8的酸、碱组分，可在水溶液 中直接滴定。如：止喘灵注射液中总生物碱的含量测定、颠 茄酊中生物碱的含量测定。
②间接滴定或非水滴定法：如大山楂丸中总酸性物质的含 量测定、草乌注射液中生物碱的含量测定等。 2、沉淀滴定法
主要用于生物碱、生物碱的氢卤酸盐及含卤素的其他有机 成分的含量测定。
20
第三节 常用定量分析方法
3、配位滴定法 包括EDTA法和硫氰酸铵法，在中药制剂分析中，
用以测定鞣质、生物碱及含Ca2+、Mg2+、Fe3+、 Hg2+等矿物类制剂的含量。如①万氏牛黄清心丸 等的含量测定就采用硫氰酸铵法；②牛黄解毒片中 石膏的含量测定。 4、氧化还原滴定法
湿法消化所用的仪器，一般为硅玻璃或硼玻璃 制成的凯氏瓶（直火加热）或聚四氟乙烯消化罐 （烘箱中加热）。所用试剂应为优级纯，水应为去 离子水或高纯水，同时必须按相同条件进行空白实 验校正。操作时应在通风橱内进行。
16
第二节 含量测定样品的处理
⒉干法消化
本法是将有机物灼烧灰化以达分解的目的，将适量样品置于 瓷坩锅、镍坩锅或铂坩埚中，常加无水Na2CO3或轻质MgO等 以助灰化，混匀后，先小火加热，使样品完全炭化，然后放入 高温炉中灼烧，使其灰化完全即可。本法不适用于含易挥发性 金属（如汞、砷等，）有机样品的破坏。
其中经典微柱色谱，也称固相萃取或液—固萃取（LSE）具有 设备简单，使用方便，快速，净化效率较高而最常用，将在此做 一简介。
LSE通常是指样品溶液加到装有合适固定相（净化剂）的长 5`～15cm，内径0.5～1cm的色谱柱中，将被测成分保留于柱上， 洗去杂质后，再洗脱被测成分进行测定，或者是使杂质强烈保留 于柱上，直接洗脱被测成分进行测定。用这种选择性好而柱效较 低的方法进行样品的净化分离，尤其适用于一类总成分的含量测 定，也可将色谱柱流出的样品进一步用GC、HPLC、TCL分离后 测定。
2
第二节 含量测定样品的处理
样品处理的主要作用有： 将被测成分有效地从样品中释放出来，并制成便于分 析测定的稳定试样。 除去杂质、纯化样品，以提高分析方法的重现性和准 确度。 富集浓缩或进行衍生化，以测定低含量被测成分。衍 生化不仅可提高检测器的灵敏度，还可以提高方法的选 择性。 使试样的形式及所用溶剂符合分析测定的要求。
12
第二节 含量测定样品的处理
⒍离子交换树脂： 憎水基质的离子交换树脂兼有离子交换
剂及大孔树脂的一些性质，所以对于在水中 溶解度不大的药物、洗脱剂中需含一定量的 有机溶剂。
离子交换树脂柱可用于除去样品中的离 子，防止组分分解，更常用于萃取样品液中 可离解化合物。
13
第二节 含量测定样品的处理
此外，近年来发展起来的固相微 萃取(Solid-Phase microextraction, SPME)和液相微 萃取(Liquid- Phase microextraction,LPME)技术有良 好的应用前景。SPME是一种无溶剂 的萃取技术，取样方式有直接取样和 顶空取样。
适用于测定具有氧化还原性的物质，如含酚类、 糖类及矿物药Fe、As等成分的中药制剂。如①磁朱 丸中全铁的含量测定采用铈量法；②牛黄解毒片中 雄黄的含量测定；③丹皮酚注射液中丹皮酚的含量 测。
21
第三节 常用定量分析方法
二、可见一紫外分光光度法
该法是中药及其制剂含量测定的一种常 用方法,具有灵敏度高，精度好和操作简便 等优点。
9
第二节 含量测定样品的处理
⒊大孔树脂：它可分为极性和非极性型
极性 丙烯酰胺聚合物; 非极性 苯乙烯和二乙烯苯的共聚物. 其吸附性质与烷基键合相硅胶相似，通过疏水作用对 非极性水溶性成份有吸附力。例如在测定复方归芪剂中 的黄芪甲苷时，用大孔树脂除去水溶性的多糖杂质，再 用30%乙醇洗脱黄芪甲苷。大孔树脂的主要特点是表面 积极大，传质速率较高和具有不同的极性及适于吸附较 大分子。 树脂在使用前需要前处理：用甲醇、乙醇、丙酮等有 机溶剂除去杂质，有时还需用酸、碱清洗。该填料用量 常为1～2g，有时也用100～150mg来萃取血、尿中药 物，操作程序类似ODS填料。
14
第二节 含量测定样品的处理
（五）消化法
对样品进行有机破坏，常用于中药制剂中重金属的检查。 常用的破坏方法有湿法消化和干法消化法。
⒈湿法消化：根据所用试剂不同，下面介绍三种常见的消化 方法。
（1）硝酸—高氯酸法 该法破坏能力强，反应较激烈，故进 行破坏时，必须严密注意切勿将容器中的溶液蒸干，以免发生 爆炸。本法适用于血，尿、组织等生物样品和含动植物药制剂 的破坏，经破坏后所得无机金属离子均为高价态，本法对含氮 杂环类有机物破坏不够完全。
3
第二节 含量测定样品的处理
一、样品的粉碎
1.目的： ① 是保证含量测定所取样品均匀而有代表性，提高测定结果的精
密度和准确度； ② 是使样品中的被测组分能更快地完全提取出来。 2.粉碎时注意事项： ① 不要粉碎得过细。样品粉碎得过细，在样品提取时，会造成过
滤困难，因此可视实际情况进行粉碎过筛。 ② 避免污染样品。在粉碎样品时，要尽量避免由于设备的磨损或
18
第三节 常用定量分析方法
（一）重量分析法
重量法可分为挥发法、萃取法和沉淀法。 1、挥发法可测定具有挥发性或能定量转化为挥发性物质的 组分含量。如：①供试品的干燥失重测定；②水分测定均属挥 发法；③中药制剂分析中灰分及炽灼残渣的测定等。 2、萃取法是根据被测组分在互不相溶的两相中溶解度的不 同，达到分离的目的。如①冰硼散中冰片的含量测定；②地奥 心血康胶囊中甾体总皂苷含量测定；③昆明山海棠片中总生物 碱的含量测定；④甘草浸膏中甘草酸的含量测定即采用萃取法。 3、沉淀法是将被测组分定量转化为难溶化合物，测定其含 量的方法，适用于制剂中纯度较高的成分。如①西瓜霜润喉片 中西瓜霜的含量测定；②苦参片中苦参总碱的含量测定；③复 方元胡注射液总碱的测定。