Ｃ ｈ ｉ ｎ ａ ） ［ Ａ ｂ ｓ ｔ ｒ ａ ｃ ｔ ］ Ｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ Ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｍ ｅ ｍ ｂ ｒ ａ ｎ ｏ ｕ ｓ ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｕ ｌ ｏ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ （ Ｍ Ｇ Ｎ ） ｉ ｎｍ ｉ ｃ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｅ ｄ ． Ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ Ｍ Ｇ Ｎｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｉ ｎｍ ｉ ｃ ｅ ｗ ａ ｓ ｅ ｓ ｔ ａ ｂ ｌ ｉ ｓ ｈ ｅ ｄ ． Ｔ ｈ ｅ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｄａ ｎ ｄｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ （ Ｌ Ｍ） ａ ｎ ｄｅ ｌ ｅ ｃ ｔ ｒ ｏ ｎ ｉ ｃ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ （ Ｅ Ｍ） ． Ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ Ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄｔ ｈ ａ ｔ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐｈ ａ ｓ ｔ ｙ ｐ ｉ ｂ ｙ ｌ ｉ ｇ ｈ ｔ ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｅ ｃ ａ ｌ Ｍ Ｇ Ｎｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ． Ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｆ Ｌ Ｍａ ｎ ｄＥ Ｍｉ ｍ ａ ｇ ｅ ｓ ｓ ｈ ｏ ｗ ｅ ｄｔ ｈ ａ ｔ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐｗ ｅ ｒ ｅ ｒ ｅ ｍ ａ ｒ ｋ ａ ｂ ｌ ｅ ｄ ｉ ｆ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｔ ｆ ｒ ｏ ｍｔ ｈ ｏ ｓ ｅｏ ｆ ｔ ｈ ｅｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ． Ｃ ｏ ｎ ｃ ｌ ｕ ｓ ｉ ｏ ｎ Ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓｃ ｏ ｕ ｌ ｄｏ ｂ ｊ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙｒ ｅ ｆ ｌ ｅ ｘｔ ｈ ｅｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｕ ｌ ｕ ｓ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｎ ｇ ｅ ｓ ｏ ｆ ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｕ ｌ ｏ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ， ａ ｎ ｄｐ ｒ ｏ ｖ ｉ ｄ ｅ ｓ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎ ｃ ｅ ｆ ｏ ｒ ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ｏ ｆ ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｉ ｓ 、 ｃ ｌ ｉ ｎ ｉ ｃ ａ ｌ ｄ ｉ ａ ｇ ｎ ｏ ｓ ｉ ｓ ａ ｎ ｄｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｐ ｙｏ ｆ ｍ ｉ ｃ ｅｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｕ ｌ ｏ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ． ［ Ｋ ｅ ｙｗ ｏ ｒ ｄ ｓ ］ Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｕ ｌ ｏ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ，ｍ ｅ ｍ ｂ ｒ ａ ｎ ｏ ｕ ｓ ；Ｍ ｉ ｃ ｒ ｏ ｓ ｃ ｏ ｐ ｙ ；Ｍ ｉ ｃ ｅ ，Ｉ ｎ ｂ ｒ ｅ ｄＢ Ａ Ｌ Ｂ ／ Ｃ
（ 温州医学院附属第一医院， ａ病理科， ｂ急诊科， 温州 ３ ２ ５ ０ ０ ０ ）
［ 摘要］ 目的 通过光镜、 电镜定量研究分析小鼠膜性肾小球肾炎（ Ｍ Ｇ Ｎ ） 的病理变化。 方法 制备小 鼠Ｍ Ｇ Ｎ模型， 对模型小鼠肾小球进行光镜、 电镜形态学观察， 并予定量分析。 结果 光镜、 电镜观察均显示 病理组具有典型的 Ｍ Ｇ Ｎ病变。病理组基底膜（ Ｇ Ｂ Ｍ） 厚度分别为 ０ ． ２ ７ ３ ｎ ｍ ， 对照组为 ０ ． １ ３ ５ ４ ｎ ｍ ， 病理组与对
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Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。病理组肾小球的平均直径（ Ｄ ） ， 平均周长（ Ｂ ） ， 平均体积（ Ｖ ） ， 平均 照组比较， 差异有统计学意义（
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截面积（ Ａ ） ， 以及体密度（ Ｖ ｖ ） ， 面密度（ Ｓ ｖ ） 均大于对照组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５或 Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。数密度（ Ｎ ｖ ） 与比表面（ ） δ 则相反， 对照组大于病理组（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） 。结论 光镜、 电镜定量研究较为客观地反映肾小球肾炎小鼠肾小球 的病变程度， 为肾小球肾炎发病机理研究及临床治疗提供有价值的参考。 ［ 关键词］ 肾小球肾炎，膜性；显微镜检查； 小鼠，近交 Ｂ Ａ Ｌ Ｂ ／ Ｃ 中图分类号： Ｒ ６ ９ ２ ． ３ １ ； Ｒ ４ ４ 文献标识码：Ａ Ｄ Ｏ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ Ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ６ ７ ２ ６ ７ ９ ０ ． ２ ０ １ １ ． ０ ２ ． ０ ２ ２
膜性肾小球肾炎（ Ｍ Ｇ Ｎ ） 是由免疫复合物沉积 在肾小球基底膜并引起基底膜弥漫性增厚的一组疾 病。本文制备小鼠 Ｍ Ｇ Ｎ模型， 对其肾小球进行光 镜、 电镜形态学观察、 定量分析， 以明确其病变特点。 １ 材料和方法 １ ． １ 动物模型复制
［ １ ］
（ Ｉ Ｆ Ｃ Ａ ， 自配， 羊毛脂 １ ０ｇ ＋ 液体石蜡 ２ ０ｍ ｌ ） ０ ． ５ｍ ｌ 进行预免。 １ ． ２ 实验分组及用药方法 本实验所用纯系 Ｂ Ａ Ｂ Ｌ ／ Ｃ小鼠， 体质量（ ２ ０ ． ４± １ ． ８ ） ｇ ， 雌雄各半， 采 用成组设计随机分为两组： 病理组（ ｎ＝ １ ５只， 隔日 注射 １ ０ｍ ｇ ／ ｍ ｌ Ｃ Ｂ Ｓ Ａ０ ． ２ｍ ｌ ） ， 连续 ４周； 对照组（ Ｎ 组， ｎ ＝ １ ５只） 全程用 ０ ． ９ ％ 氯化钠注射溶液 ０ ． ２ｍ ｌ （ Ｎ ． Ｓ ） 作对照， ４周末杀检， 取肾皮质做光镜、 电镜 观察， 并做定量分析。 １ ． ３ 观察项目 １ ． ３ ． １ 光镜定性观察 ① Ｈ Ｅ染色： 一般观察肾小 球的大小、 小球细胞数、 系膜区及上皮细胞有无增生 以及毛细血管壁有无增厚， 有无渗出及新月体形成 等。② Ｐ Ａ Ｓ Ｍ 染色： 主要观察膜性肾炎的特征性病 变— — —“ 钉突” 。
Ｂ ） 。Ｅ Ｍ 定量参数选择： Ｇ Ｂ Ｍ 厚度； 足突密度（ Ｎ ｓ ） 、 （
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Ｄ ｘ ） 、 足突间隙平均面积（ Ｓ ｘ ） 。 足突间隙平均直径（ １ ． ４ 统计学处理 本实验资料采用 Ｓ Ｐ Ｓ Ｓ １ ３ ． ０软件 进行方差分析及 ｑ 检验。 ２ 结果 ２ ． １ 肾小球病理形态学观察 与对照组相比， 病理 组肾小球轻度肿胀， 系膜细胞增生， 基质增宽， 毛细 血管壁增厚， 部分显示膜性病变， 脏层上皮细胞轻度 Ａ Ｓ Ｍ 染色显示少量“ 钉突” 形成。病 肿胀与增生。Ｐ 理组电镜观察显示： Ｇ Ｂ Ｍ 弥漫性显著增厚， 足突融 Ｂ Ｍ 内可见小圆点样分布稀疏的沉积 合， 上皮下 Ｇ 物， 部分可见少量粗大颗粒状致密沉积物。 ２ ． ２ 肾小球形态计量分析 光镜与电镜立体学定
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次级样品： 从中任取 ６块组织包埋（ 国产 ６ １ ８环氧树 脂） 制成 Ｅ Ｍ 包埋块。③三级样品： 随机选 ２包埋块 切超薄切片数张， 各随机选 １张观察。④四级样品： ０ ０ ０倍照片 １张， 再光学放大 １ ． ５倍， 每一视野摄 ８ 制成 ５寸放大照片。（ ２ ） 光镜（ Ｌ Ｍ） 三级取样： ①初 级样品： 取肾皮质 ２ｃ ｍ ×２ｃ ｍ ×１ｃ ｍ 大 小 一 块， ２ ０ ％甲醛固定， 乙醇脱水， 石蜡包埋。 ② 次级样品： 每隔 ２ ０ ０ ｍ切片 １张， 切片厚度 ５μ ｍ ， 共 ３张。 ③ μ 三级样品： 每张切片各保存图像 ２张， 拷入软盘， 送 电子科技大学金盘公司作定量分析。 １ ． ３ ． ３ 摄像条件 （ １ ） Ｅ Ｍ： 每铜网摄像恒定在肾 小球的血管极、 尿极和两侧周边及小球中央。一铜 网各摄片 ５张。（ ２ ） Ｌ Ｍ： 每切片恒定在 ２个角上保 存图片， 每只小鼠取 ３张切片。每张切片各取 ２张 图片。（ ３ ） 放大倍数： Ｍ： 根据一张照片需观察 ①Ｅ 基底膜厚度、 窗孔密度的原则， 摄像倍数为 ８ ０ ０ ０倍， ． ５倍 ５寸照片。全部照片放大倍数恒 再光学放大 １ 定在 １ ２ ０ ０ ０倍。②Ｌ Ｍ： 据北京医科大学电镜室郑富 盛教授著《 细胞形态计量学》 一书， 要求测试数目在 １ ０ ０～ ４ ０ ０个不等， 方能达到变异系数（ Ｃ Ｖ ） 在５ ％以 Ｍ 放大倍数为 １ ０ ０倍， 每张图片包含 ７ 下。本实验 Ｌ ～ １ ０个肾小球， 每组 ３ ０～ ３ ６张照片内肾小球个数 能满足此要求。 肾小球 Ｌ Ｍ 定量参数选择： 体密度（ Ｖ ｖ ） 、 面密度
用碳化二亚胺（ Ｅ Ｄ Ｃ上海
产） 和无水乙二胺（ Ｅ Ｄ Ａ ， 成都产） 将天然牛血清白 蛋白（ 等电点 ４ ． ５ ， 国产电泳纯） 阳离子化成为阳离 子化牛血清白蛋白（ Ｃ Ｂ Ｓ Ａ等电点 ９ ． ０以上） 。注 射前用 ０ ． ０ １ｍ ｏ ｌ ／ Ｌ Ｐ Ｂ Ｓ溶解， １ ５０ ０ ０ｒ ／ ｍ ｉ ｎ离心， 去 除不溶性物质， 配制成 １ ０ｍ ｇ ／ ｍ ｌ 浓度的溶液。正式 注射前 １周每只小鼠皮下多点注射不完全弗氏佐剂
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Ｄ ） ， 平均周 量分析表明： 病理组肾小球的平均直径（
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Ｂ ） ， 平均体积（ Ｖ ） ， 平均截面积（ Ａ ） ， 以及体密 长（ 度（ Ｖ ｖ ） ， 面密度（ Ｓ ｖ ） 均大于对照组（ Ｐ＜ ０ ． ０ ５或 Ｐ ＜ ０ ． ０ １ ） 。数密度（ Ｎ ｖ ） 与比表面（ ） 则相反， 对照 δ 组大于病理组（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 以上说明病理组肾小球 Ｇ Ｂ Ｍ） 厚度分别为 ０ ． ２ ７ ３ 明显增大。病理组基底膜（ ｎ ｍ ， 对照组为 ０ ． １ ３ ５ ４ｎ ｍ 。病理组与对照组比较， 差 异有显著性（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 说明病理组肾小球基底膜 度明显增加。病理组足突密度（ Ｎ ｓ ） 明显下降， 与对 照组有显著性差异（ Ｐ＜ ０ ． ０ １ ） ， 说明病理组足突触
Ｑ ｕ ａ ｎ ｔ ｉ ｔ ａ ｔ ｉ ｖ ｅｓ ｔ ｕ ｄ ｙｏ ｆ ｍｏ ｒ ｐ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｉ ｃ ａ ｌ ｉ ｍａ ｇ ｅ ｓ ｏ ｎｍｅ ｍｂ ｒ ａ ｎ ｏ ｕ ｓ ｇ ｌ ｏ ｍｅ ｒ ｕ ｌ ｏ ｎ ｅ ｐ ｈ ｒ ｉ ｔ ｉ ｓ ｏ ｆ ｍｉ ｃ ｅ Ｚ Ｈ Ａ Ｎ ＧＨ ｕ ｘ ｉ ａ ｎ ｇ ， Ｚ Ｈ Ａ Ｎ ＧＨ ａ ｉ ｙ ａ ｎ ， Ｗ Ａ Ｎ ＧＬ ｉ ， Ｙ Ａ Ｎ ＧＫ ａ ｉ ｙ ａ ｎ （ Ｄ ｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍ ｅ ｎ ｔ ｏ ｆ Ｐ ａ ｔ ｈ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， Ｗ ｅ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕＭ ｅ ｄ ｉ ｃ ａ ｌ Ｃ ｏ ｌ ｌ ｅ ｇ ｅ ， Ｗ ｅ ｎ ｚ ｈ ｏ ｕ３ ２ ５ ０ ０ ０ ，