计算
从标准管中选一管与测定管光吸收值接
近值，按公式
C测
C标A测 A标
计算待测血清样本的蛋白质浓度，从上
可选 A测= 0.317 g/L，C标=0.354 g/L， A标=1.6 g/L；则得到：C测=1.432 g/L。
注意事项
• 1.本实验是定量实验，要求所有玻璃 仪器必须清洁，整齐、干燥。蛋白质 标准液和淀粉上清液取量必须准确。
双缩脲比色法
测定面粉中蛋白质的含量
一 原理 二 实验材料与仪器 三 操作步骤 四 计算 五 注意事项
原理
1.双缩脲（NH2CONHCONH2）是两 个尿素分子经180 ℃左右加热，放出 一个分子氨后得到的产物。
原理
2.在强碱性溶液中，双缩脲与 CuSO4形成紫色络合物，称为双缩脲 反应。凡具有两个肽键或两个直接连 接的肽键，或能过一个中间碳原子相 连的肽键，这类化合物都有双缩脲反 应。
植物中活动重 要的参与者，它影响和 调节着细胞与细胞，组 织与组织间的生理活动， 并且反馈着细胞与组织 的化学反应信息。
功能肽是由氨基酸构成， 活性高，在极微量的使用下， 都能发挥作用，它们在人体内 被利用后迅速的被代谢，最终 变为氨基酸和水，无残留，无 副作用。
操作步骤
3.离心，4000dr/min，离心15分钟； 4.取上清液比色
操作步骤
<二>标准曲线的制作与 样品中蛋白质的测定
1.取7支试管，编号，按照表1 数据操作。
2.利用分光光度计测光吸收值 并记录。
表1
标准管
测定管
管号
0
试剂
1
2
3
4
5
6
蛋白质
标准液 (10mg/
-
0.2
0.4
0.6
0.8
1
1.仪器和材料： 分光光度计、 7支试管、 1mL 刻度吸管3支、 移液器、坐标纸、摇床、离心机、 具塞三角瓶、分析天平。
2.试剂：四氯化碳溶液、少 许面粉、双缩脲试剂、9 g/L的 NaCl溶液、蛋白质标准液 （10 g/L)。
分析天平
具塞三角瓶
离心机
摇床
操作步骤
<一>.样品处理
1.0.25 g小麦面粉＋2ml四氯化碳； 2.加塞，在摇床上振摇30分钟， 使之充分混匀、反应，然后于实验台上 静置10分钟；
……
……
很早以来科学家就 想把它们应用到人们的日 常饮食中，作为营养补充剂和功能因 子，用以影响或改善人们的营养代谢、 脂肪代谢、糖代谢、调节神经系统等。
测定方法
测定面粉中蛋白质的含量
双缩脲比色法
一 原理
半微二量凯试氏剂滴氮法（水蒸气蒸馏法） Foli三n-酚操作试步剂骤法 紫外四吸收计法算 考马斯五 亮注蓝意染事项色法
-
mL)
面粉溶
液上清
-
-
-
-
-
-
1
液mL
氯化钠
溶液
1
0.8
0.6
0.4
0.2
-
-
mL
双缩脲
试剂
4
4
4
4
4
4
4
mL
λ光吸 收值
0
0.085 0.181 0.261 0.354 0.438 0.317
各管浓
度
0
0.4
0.8
1.2
1.6
2
？
mg/ml
操作步骤
3.在坐标纸上以各管蛋白质 含量为横坐标，光吸收值为纵坐 标，绘制标准曲线。
• 2.各管加好样后必须充分混匀。 • 3.显色反应需在20到30min才完成。
谢谢观赏
原理
3.测定： 在一定的浓度范围内， 紫色络合物颜色深浅与蛋白质含量呈 线性关系。而与蛋白质分子量及氨基 酸成分无关，故可在540 nm处比色再 与同样处理的标准蛋白质来比较测定 蛋白质含量。
测定范围为1－10mg蛋白质/ml。 干扰这一测定的物质主要有：
硫酸铵、Tris缓冲液和某些氨基酸等。
实验材料与仪器