吲哚试剂 （对二甲基氨基苯甲醛）
玫瑰吲哚 （阳性反应）
2、V-P试验 [原理]
葡萄糖
丙酮酸
缩合
乙酰乳酸
脱羧
乙酰甲基甲醇
碱性条件
二乙酰
与培养基中精氨酸 的胍基结合
红色化合物（阳性反应）
3、MR试验
[原理]
葡萄糖 丙酮酸
大量混合酸
pH值降至4.5以下
非酸性末端产物(醇、醛等）
pH值＞6.2 甲基红指示剂 培养基橘黄色(阴性反应)
荡，再放入 37℃温箱中保温 15-30min。若培养物呈
红色者，为VP 试验反应阳性 3、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
MR试验
1、将另一半葡萄糖蛋白胨水培养液内加入甲 基红试剂 2 滴，培养基变为红色者为阳性，变黄 色者为阴性。 2、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
细菌生化实验误差原因？
柠檬酸盐 利用试验 吲哚试验 硫化氢试验
IMViC 试验
硝酸还原酶试验， 淀粉水解试验
内容
一、糖发酵试验 二、IMViC试验
1、吲哚试验
2、V-P试验 3、MR试验 三、淀粉水解试验
说明
1、本次细菌的生化试验仅选择5项代表性试验
2、本次实验均按传统的生化试验方法进行检测
现代快速生化检测
现代快速生化检测
实验三
细菌鉴定中常用的几种生化试验
细菌的生化试验
用生化的方法来检测细菌对各种基质 的代谢作用及代谢产物，借以鉴别细菌 种类，这种生化试验称为细菌的生化反 应试验；是鉴别细菌的重要依据 。
碳水化合物 代谢试验
糖发酵试验 甲基红试验（MR） V-P试验
常 见 的 生 化 反 应
碳源和氮源 利用试验
蛋白质和氨基 酸代谢试验 各种酶类试验
大盒生化鉴定管
快速检测试纸
全自动微生物鉴定系统 使用生化鉴定试剂盒对革兰氏阴性菌和革兰氏阳 性菌进行细菌鉴定。
VITEK®全自动 化微生物鉴定 系统
[目的要求]

1、掌握细菌生理生化反应原理，掌握细菌鉴 定中常用的生理生化反应的测定方法； 2. 通过不同细菌对不同含碳、含氮化合物的 分解利用情况，了解细菌代谢类型的多样性； 3、了解细菌在不同培养基中的不同生长现象 及其代谢产物在鉴别细菌中的意义。
是一组试验； IMViC是靛基质试验或称吲哚试验（I）、 甲基红试验（M）、V-P试验（V）和柠檬
酸盐利用试验（C）的缩写，i是为了发
音的需要加上的；

常用于革兰氏阴性的肠道细菌检测中，
可用于区分产气杆菌属和大肠杆菌属。
1、吲哚（靛基质）试验 [原理] 色氨酸几乎存在所有蛋白质中，某些
细菌如大肠杆菌等具有色氨酸酶。 蛋白胨中的色氨酸 色氨酸酶 靛基质（无色吲哚）
荡，静置分层后，沿管壁缓缓加入5-10滴吲哚试剂，
若上层乙醚层呈玫瑰红色者，为吲哚试验反应阳
性。 3、 “+”表示阳性反应， “-”表示阴性反应。
V-P试验
1、确定有无细菌生长？并用空试管将葡萄糖蛋白胨水
培养液分为2半；
2、将其中1半葡萄糖蛋白胨水培养液内加入5-10滴
40%KOH，然后加入等量的 5%α-萘酚溶液，用力振
现代快速生化检测采用的方式： 简化试剂配制 简化操作过程 底物，指示剂、抑制剂的改良 操作、检测的高度自动化
现代快速生化检测
1、显色培养基
2、生化鉴定管 3、快速检测试纸 4、自动化微生物鉴定系统
显色培养基
海博金黄色葡萄 球菌显色培养基
环凯沙门氏菌显色 培养基
生化鉴定管
柠檬酸盐生化鉴定管
木糖生化鉴定管
3、 观察记录（直接观察记录或加入试剂反应后 再观察记录）
糖发酵试验（直接观察记录）
①确定有无细菌生长？
②确定各菌对糖的分解利用情况： 不利用：用 “－” 表示 产酸： 用 “+” 表示 产酸产气：用 ⊕ 表示
吲哚（靛基质）试验
1、确定有无细菌生长？
2、向蛋白胨水培养液内加入乙醚1-2mL，用力振
甲基红指示剂 培养基变红(阳性反应)
三、淀粉水解试验 [原理]
淀粉酶
检测细菌是否可以产生分泌到胞外的淀粉酶。 淀粉 糊精，双糖和单糖等
碘液 不出现蓝色反应， 菌落周围呈现透 明圈
蓝色
[实验材料]
培养基：葡萄糖发酵培养基，乳糖发酵培养基， 葡萄糖蛋白胨水培养基，蛋白胨水培养 基，固体淀粉培养基。
菌种：大肠杆菌，枯草杆菌，普通变形菌，产气 肠杆菌 试剂：卢戈氏碘液，甲基红指示剂，40%KOH， 5%α-萘酚，吲哚试剂，1.6%溴甲酚紫 仪器：略
[注意事项]
1）纯培养物方可进行生化试验
2）严格无菌操作，防止污染情况的发生。
3）减少试剂因素、其它人为因素的误差
4）标记必须准确
[问题和思考]
1、讨论 IMViC 试验在微生物学检验上的意义 2、你怎样解释淀粉酶是胞外酶而非胞内酶？ 3、不利用碘液你怎样证明淀粉水解的存在？
[方法和步骤]
1、 试管（平板）标记
葡萄糖发酵管 乳糖发酵管 吲哚试验管 V-P试验管 淀粉水解试验平板：4个
用记号笔或者标签纸 在平板底部划成或者 区分为 2 部分
各 9支
2、接种培养
试管接种：以无菌操作分别接种少量待测菌到以上 相应试管中，每菌接2支管,留1管作空白对照不接种， 置37℃恒温箱中培养24～48h。 葡萄糖和乳糖微量发酵管接种:采用接种针 平板接种：以无菌操作分别接种少量待测菌到以上 相应平板中,每平板接2种菌,将平板倒置在 37℃温箱 中培养 24h.


[实验原理] 一、糖发酵试验
根据细菌分解利用糖能力的差异表现 出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。
各种糖
细菌
有机酸（乳酸、醋酸、丙酸等） 气体 （氢气，二氧化碳等）
产酸： 指示剂 （溴甲酚紫）， 由紫色（pH6.8以上)变为黄色 （pH5.4以下) 产气 倒置的德汉氏小管