HPLC法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D 含量
石俊英，王颖，巩丽丽，任霜亭
[摘要] 目的：采用反相高效液相法测定桔梗不同部位、不同产地药材中桔梗皂苷D含量。
方法：采用Phenomenex C18色谱柱，流动相比例为CH3CN：H2O：2%H3PO4= 28：57 ：15，流速为1.0 ml/ min，检测波长210 nm，柱温25℃。
结果：山东淄博GAP 基地桔梗药材中桔梗皂苷D 含量最高，质量最佳；不同部位中韧皮部及根上部含量最高。
结论：该方法准确、可行，可以作为测定桔梗皂苷D 的定量方法。
[关键词]桔梗；HPLC；桔梗皂苷D；含量
桔梗来源于桔梗科植物桔梗Platycodon grandif lorum Jacq.A.DC. 的干燥根。
桔梗药材中含有皂苷类、多糖、脂肪酸、氨基酸等多种成分，其中皂苷类是主要的药理活性成分。
桔梗皂苷的种类非常多，包括桔梗皂苷A-L 以及远志苷D、
D2 等。
我们曾研究了不同产地桔梗中总皂苷成分与质量的相关性[1]。
许传莲等采用RP-HPLC 法测定了不同产地桔梗中皂苷D 的含量，选择C18柱为色谱分析柱，检测波长为210 nm[2]。
朱丹妮等采用HPLC-ELSD法，以乙腈水( V/ V) = 28：72 为流动相，ELSD-500为检测器，进行了外标法定量[3]。
目前对于桔梗皂苷D 的测定方法研究较少，本文期望通过实验研究，探讨桔梗药材不同部位中桔梗皂苷D 的分布规律，不同产地桔梗药材中桔梗皂苷D 的含量，为进一步制定桔梗的含量测定方法和质量评价指标提供科学依据。
1 仪器及材料
1.1仪器
AGILENT 1100 LC 高效液相色谱仪( 美国) ；AGILENT CHEMSTAT ION 工作站( 美国安捷伦科技公司) ；检测器：AGILENT DAD；色谱柱：Phenomenex-C18 柱( 250×4.6 mm，粒度5 µm；迪马公司)。
1.2 试验材料
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的桔梗皂苷D 对照品，加甲醇溶解，配成0. 4 mg/ ml，作为对照品溶液。
2. 2 供试品溶液的制备
精密称取本品粉末4 g，以甲醇25 ml超声提取30 min，过滤，回收甲醇，浸膏加水以乙醚脱脂，水液以水饱和的正丁醇提取，提取液蒸干，以甲醇定容至10ml。
2. 3 测定方法
色谱柱：Phenomenex-C18柱( 250×4. 6 mm，5 µm) ；柱温：25℃；流动相：乙腈：水：2% 磷酸( 28：57：15) ；流速：1. 0 ml/ min；检测波长：210 nm。
设定HPLC 色谱仪的测定参数：在线脱气，自动进样，每次10 µl流速1. 0 ml/ min，柱温25 ℃，记录25 min的色谱图。
在供试品色谱中，以相对保留时间和峰面积为参照，对比分析图谱，进行鉴别。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液2，5，10，15，20，25，30µl进样，按上述色谱条件测定峰面积。
以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：桔梗皂苷D Y= 85. 79x+4. 8975，r= 0. 9995，参见图2。
表2 精密度试验结果
对照品编号 1 2 3 4 5 RSD(%)
峰面积354.8828 354.3709 353.2275 351.2946 353.7172 0.39
2. 4. 2 精密度试验取同一对照品溶液10µl连续进样5 次，测其峰面积，计算RSD。
结果见表2。
2. 4. 3 稳定性试验取同一供试品溶液，分别在0，2，4，8，12，24，48 h测定峰面积，计算RSD，结果见表3。
2. 4. 4 重复性试验取桔梗药材供试品5 份，按样品测定法测定，计算RSD。
结果见表4。
2..4. 5回收率试验采用标准加入法，精密称取已测知含量的样品5 份，分别加入一定量的对照品溶液，按样品测定项下方法操作，计算回收率，结果见表5。
表6 桔梗不同部位所含桔梗皂苷D的含量比较（n=3）样品编号产地加工方法采收地点桔梗皂苷D含量%
12 桔梗木质部山东淄博0.26
13 桔梗韧皮部山东淄博0.44
14 桔梗栓皮山东淄博0.03
15 桔梗芦头山东淄博0.26
16 桔梗根上端山东淄博0.41
17 桔梗根中端山东淄博0.36
18 桔梗根下端山东淄博0.34
表7 不同产地桔梗中桔梗皂苷D的含量比较（n=3）样品编号产地加工方法采收地点桔梗皂苷D含量%
1 去皮桔梗山东淄博0.39
2 去皮桔梗山东泗水0.20
3 去皮桔梗山东临朐0.18
4 去皮桔梗山东青岛0.36
5 去皮桔梗安徽亳州0.14
6 去皮桔梗河北安国0.26
7 去皮桔梗陕西丹凤0.38
8 去皮桔梗黑龙江饶河0.18
9 去皮桔梗贵州贵阳0.34
10 去皮桔梗河南桐柏0.33
11 去皮桔梗河南周口0.32
2. 5 样品测定
按供试品溶液制备项下方法制备样品溶液，用0. 45µm滤膜过滤后，进样
10µl，按上述色谱条件测定。
2. 6 结果
桔梗不同部位的成分比较见表6。
桔梗皂苷D的含量依次为：韧皮部> 根上段> 根中段> 根下段> 木质部> 芦头> 栓皮。
韧皮部中桔梗皂苷D 的含量最高，栓皮含量最少。
不同产地样品桔梗皂苷D 的含量见表7。
桔梗皂苷D 的含量依次为：山东淄博> 陕西丹凤> 山东青岛> 贵州贵阳> 河南桐柏> 河南周口> 河北安国> 山东泗水> 山东临朐> 安徽亳州。
山东淄博产药材中桔梗皂苷D 含量最
高。
3 讨论
桔梗皂苷类成分为桔梗的主要活性成分，桔梗皂苷D 在桔梗皂苷类成分中含量最高，可以在一定程度上反映桔梗的药材质量。
从实验结果可以看出，桔梗的不同部位中，桔梗皂苷D 含量以韧皮部中含量最高( 0. 44%) ，栓皮中含量极少( 0. 03% ) ，可以在产地加工时去除。
这提示我们桔梗传统的去皮加工技术是科学的。
从实验结果可以看出，不同产地的药材质量差别较大，其中山东淄博GAP 基地产药材桔梗皂苷D含量最高，质量最佳，其次为陕西丹凤、山东青岛、贵州贵阳、河南桐柏等。
因此，建议使用桔梗GAP 基地药材。
[ 参考文献]
[ 1] 石俊英，董其亭，巩丽丽，等. 不同产地桔梗中总皂苷成分与质量的相关性研究[ J ] . 山东中医药大学学报，2006，30 ( 3) ：247 ~250.
[ 2] 许传莲，杨腊虎，郑毅男，等. 应用RP HPLC 法测定不同产地中桔梗皂苷D[ J] . 吉林农业大学学报，1999，21( 4) ：35.
[ 3] 朱丹妮，舒娈. HPLC ELSD 法测定桔梗中桔梗皂苷D 的含量[ J ] . 植物资源与环境学报，2001，10( 4) ：11~ 13.。