脑脊液常规检查简易操作程序
一、一般性状检查
观察颜色、透明度、有无凝块，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等。

二、潘氏(Pandy)球蛋白定性试验
取5％苯酚溶液2—3m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l一2滴，衬以黑背景，立即观察结果。

结果判断
阴性：清晰透明，不显雾状。

极弱阳性(土)：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。

弱阳性(十)：灰白色云雾状。

阳性(2十)：白色浑浊。

强阳性(3十)：白色浓絮状沉淀。

最强阳性(4十)：白色凝块。

三、细胞计数
（一）、细胞总数
1、对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、
白细胞数，其总和即为每μl的细胞数。

再换算成每升脑脊液中的细胞
数。

如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl脑脊液中细胞总数。

如用升表示，则再乘以106。

2、浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入含
红细胞稀释液0.38m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl脑脊液的细胞总数。

（二）、白细胞数
1、非血性标本：
小试管内放入冰乙酸1—2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3—4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数。

2、血性标本：
将混匀的脑脊液用1％冰乙酸溶液稀释后进行计数。

为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正：
每μl脑脊液内白细胞校正数＝每μl脑脊液内白细胞未校正数
每μl脑脊液内内红细胞数×每μl血液内白细胞
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每μl血液内红细胞
（三）、细胞分类
在高倍镜下根据细其胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞，计算出百分率。

如直接分类不易区分细胞，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清l滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类。

四、三大染色
（一）、革兰氏染色
1、将脑脊液立即离心沉淀，取沉淀物涂片2张。

2、涂片应在室温中，或置37℃温箱中干燥，用火焰固定。

3、加结晶紫染1min，清水冲去染液，倒去玻片上水。

4、加碘液染1min，水冲。

5、加脱色液（75%乙醇），不时摇动10～30s，至无紫色脱落为止，水洗。

6、加复染液，染30s，水洗。

干后镜检。

7、报告：涂片找到“革兰氏阴(阳)性细菌”，或未见革兰氏细菌。

（二）、抗酸染色
石炭酸复红染色法：
1、涂片经火焰固定后，加石炭酸复红溶液，徐徐加热至有蒸气出现，切不可
沸腾。

染色5min，冷却后水洗。

2、加脱色剂，不时摇动玻片至无红色脱落为止，水洗。

3、加复染液，染0.5～1min，水洗。

4、干后镜检。

分枝杆菌呈红色，背景为蓝色。

金永染色法：
1、涂片固定后加第1液5～10min，不必加热。

2、弃去第1液后水洗，加第2液（脱色液）脱色至无红色脱落为止，水洗。

3、加第3液（复染液）复染30s，水洗，待干，油镜镜检。

抗酸菌染成红色，
非抗酸菌及细胞染成谈蓝色。

单张涂片抗酸染色阳性率较低，但如果检查涂片增至4张，阳性率可达80%以上。

报告：涂片发现“抗酸杆菌”或“未见抗酸杆菌”。

（三）、墨汁染色-真菌检查-新形隐球菌检查
1、取脑脊液，以2000r／min离心10min，以沉淀物作涂片，加优质经过滤的
细墨汁l滴，混合，加盖玻片检查。

2、先用低倍镜检查，如发现在黑色背景中有圆形透光小点，中间有一细胞大
小的圆形物质，即用高倍镜仔细观察结构，新形隐球菌直径5—20μm，可见明显的厚膜，并有出芽的球形孢子。

每次镜检用空白墨水滴作为对照，以防墨汁污染。

3、报告：涂片发现“新形隐球菌”。