延胡索酸泰妙菌素检验操作规程小仙当第 1 页共 12 页范围说明1 .依据及范围根据《中华人民共和国兽药典2015年版》制定延胡索酸泰妙菌素标准检验规程，规定了延胡索酸泰妙菌素理化分析方法及标准，确保使用方法科学，测量数据准确。
2.目的及责任建立本检验标准规程，以指导化验室更好的检验分析，质量管理部检验人员对本检验标准规程实施负责。
3.引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单或修订版均不适用于本标准《中华人民共和国兽药典2015年版》第一部第一部分GB/T6682 分析实验室用水规格和实验方法GB /T8170 数值修约规则4.试剂除另有说明外，实验中所用试剂应不低于分析纯，液相所用试剂均为液相专用纯，用水为超纯水（哇哈哈纯净水），其它所用水应符合GB/T6682中规定的三级水要求。
5.方法说明标准中对同一成分并列的特定方法，可根据实际情况任选一种，在有争议时，同一成分并列的测定方法以先列的方法为准。
5.1 测定次数条件下测定两次。
5.2 空白实验在重复性条件下做空白实验。
5.3 结果表述所得结果应按GB/T8170修约，保留2位小数，当含量小于0.10％时结果保留2位有效数字5.4 分析结果的采用当所得试样的两个有效分析值之差不大于表3规定的允许误差时，以平均值作为最终分析结果，否则应按附录A的规定进行追加分析和结果处理。
5.5 质量保证和控制5.5工作曲线应定期（不超过3个月）用标准物质校准，如果改变仪器条件，应重新绘制工作曲线，并用同类型标准物质校准，当标准物质的分析值与标准值之差大于表3所规定允许差的0.7倍时，应重新绘制工作曲线。
5.6一般情况下，标准滴定溶液的浓度应每两个月重新标定，如果两个月内温度变化超过10℃，应及时标定，重新标定后，应用标准物质进行鉴定验证。
性状本品为白色或类白色结晶性粉末，无臭，无味。
本品在甲醇或乙醇中易溶解，在水中较易溶解，在丙酮中略溶，在己烷中几乎不溶。
比旋度检测1.仪器和用具万分之一电子天平、旋光仪2.药品试剂二氧六环AR3.操作步骤精密称定样品0.5g置100ml容量瓶中加二氧六环溶解并稀释至刻度。
（稀释成每1ml中含5mg的溶液），在25℃时按旋光仪使用操作规程操作。
4.结果计算 [α] t D=100α/1c式中：D为钠光谱的D线； t为温度；I为测试管长度dm; α为测得的旋光度；C为100ml溶液中含有被测物质的重量，g（按干燥品或无水物计算）。
5.结果测定比旋度为+24°至 +28°。
鉴别1.仪器和用具高效液相色谱仪、万分之一分析天平、红外光谱仪。
2.药品试剂同含量检测所用药品试剂溶剂。
2.操作步骤2.1在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
2.2本品的红外光吸收图谱应与对照品图谱一致。
3 结果判定3.1供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。
3.2本品的红外光吸收图谱应与对照品图谱一致。
酸度1.仪器和用具百分之一电子天平、酸度计2.药品试剂按GB/T6682规定用水3.操作步骤称取样品1.0g,放入50ml烧杯内，加入20ml蒸馏水溶解，等样品完全溶解后，按PH计操作规程进行操作，打开PH计，将PH测量电极用水清洗干净，放入被测样品中，等待PH计数值稳定后，读取数据，检测完毕后及时清洗PH电极。
4.结果判定其pH为3.1～4.1 。
吸光度1.仪器和用具紫外分光光度计、万分之一分析天平2.药品试剂按GB/T6682规定用水3.操作步骤精密称定本品2.5g，加水溶解并定容至50ml，（制成每lml中含50mg的溶液），按紫外分光光度计操作规程操作，打开紫外-可见分光光度计，待仪器预热自校完毕，分别调整波长650nm、400nm处进行测定。
4.结果判定在650nm的波长处测定，吸光度不得过0.030，在400nm的波长处测定，吸光度不得过0.150。
熔点1仪器和用具熔点仪、毛细管2操作步骤取三根毛细管，将样品放入毛细管中压实，保持高度1㎝，然后按熔点仪的使用操作规程操作进行检测，打开熔点检测仪，放入毛细管升温，在温度升至样品融化温度前10度，进行缓慢加热升温速度为每分钟1度，待样品完全溶解后，读取平均值。
3结果判定熔点为143-152℃.干燥失重1.仪器与设备万分之一电子天平、称量瓶、烘箱2.操作步骤精密称取本品约1-1.5g，精确至0.0001记为W2，至烘至恒重的称量瓶中称其重量为W1，放置105℃干燥箱中干燥至恒重，取出放入冷凝器中冷却30分钟，称其重量为W3。
3.计算(W1+W2-W3)/W1*1004.结果判定减失重量不得过0.5%。
延胡索酸含量1.使用设备与仪器万分之一天平、滴定管50ml2.药品试剂2.1 0.1mol／L氢氧化钠滴定液取澄清的氢氧化钠饱和溶液5.6ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。
2.2 0.5mol／L氢氧化钠滴定液取澄清的氢氧化钠饱和溶液28ml，加新沸过的冷水使成1000ml，摇匀。
标定：取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾0.6g，0.5mol／L氢氧化钠滴定取在105℃干燥至恒重的基准邻苯二甲酸氢钾3g精密称定，加新沸过的冷水50ml，振摇，使其尽量溶解；加酚酞指示液两滴，用本液滴定，在接近终点时，应使邻苯二甲酸氢钾完全溶解，滴定至溶液显粉红色，同时做空白实验。
计算公式：MC1=(V-V1)*0.2042式中：C1：滴定液的浓度 V1：空白消耗滴定液的体积V：消耗滴定液的体积 M：邻苯二甲酸氢钾重量0.2042为每1ml NaoH滴定液（1.000mol/L）相当的以克表示的邻苯二甲酸氢钾的质量。
3.操作步骤称取样品1 g（精确至0.0002g），放入250mL锥型瓶中，加100mL水，摇匀，在水浴中温热使其溶解，冷却后，加酚酞指示液3滴，用0.5mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至淡红色，保持30s不褪色为终点同时做一空白试验。
4 计算公式［（V-V1）/1000］C*58.04 （V-V1）C*0.05804延胡索酸含量%= ×100％= ×100％（1-水分）M （1-水分）M式中：V:消耗滴定液的ml数V1：空白滴定液ml数 C:滴定液的浓度 M：样品的重量g58.04：延胡索酸（1/2C4H4O4）的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）。
5、结果判定按干燥品计算，含延胡索酸应为18.6%-19.4%。
灼烧残渣检测1.使用设备与仪器坩埚、马弗炉、万分之一天平2.药品试剂硫酸3.操作步骤精密称取供试品1.0g，精确至0.0001g置已炽灼至恒重的坩埚中，缓缓炽灼至完全炭化，放冷；加硫酸0.5～1.0ml使湿润，低温加热至硫酸蒸汽除尽后，在500～600℃炽灼使完全灰化，移至干燥器内，放冷，精密称定后，再在500～600℃炽灼至恒重，即得。
残渣用于重金属检测。
4.计算W1+W2-W3灼烧残渣%= *100％W2式中；W3:坩埚和残渣的质量（单位g） W1:坩埚的质量（单位g）W2样品的质量（单位g）5.结果判定不得过0.1%重金属检测1仪器和设备百分之一电子天平2 试剂2.1醋酸盐缓冲液（PH3.5）称取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸溶液38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5，用水稀释至100ml，即得。
2.2硫代乙酰胺溶液称取硫代乙酰胺4g置100ml容量瓶中，加水使溶解后定容至刻度，摇匀即得。
置冰箱中保存2.3硫代乙酰胺试液临用前取混合液（由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成）5.0ml，加硫代乙酰胺溶液1ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立即使用。
2.4标准铅溶液的制备称取硝酸铅0.1599g,置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。
精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每1ml相当于10ug的pb）。
本液仅供当日使用。
2.5硝酸盐酸3.操作步骤3.1 在灼烧残渣检测项下残留炽灼残渣的坩埚中加硝酸0.5ml，置水浴锅上蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后放冷加水15ml，先滴加一滴酚酞指示液，再滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5）2ml,微热溶解后，移至纳氏比色管，加水稀释成25ml，作为乙管。
3.2另取一个已炽灼至恒重的空坩埚中加入硝酸0.5ml，置水浴锅上蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后放冷加水15ml，微热溶解后，转移至纳氏比色管中，再往纳氏比色管中加标准铅溶液1ml与醋酸盐缓冲液（PH3.5）2ml后，加水稀释成25ml，作为甲管。
3.3再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml,摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管的颜色不得深于甲管。
3.4标准铅溶液的加入量的计算T=W*P/C式中：T: 标准铅溶液的加入量（单位ml）W: 样品的质量（单位g）P:检出限量（单位ppm）C: 标准铅溶液的浓度（单位ug/ml）4 结果判定不得过10ppm.泰妙菌素含量测定1.仪器和用具万分之一电子天平、高效液相2.色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、检测波长为212nm、进样量20ul 流速：1.2ml/min 柱温：30℃3. 药品试剂3.1 6%高氯酸溶液取高氯酸8.5ml，加水至100ml，摇匀，即得。
3.2 碳酸铵溶液取碳酸铵10g，加水800ml使溶解，加6%高氯酸溶液24ml，用水稀释至1000ml，摇匀，滤过，即得。
3.3 流动相甲醇-碳酸铵溶液-乙腈=49:28:23取甲醇490ml、碳酸铵溶液280ml、乙腈230ml，混合均匀，即得。
4 操作步骤精密称定本品0.1g，精确至0.0001g置25ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，作为供试品溶液，精密量取20ul，注入液相色谱仪，记录色谱图；另延胡索酸泰妙菌素对照品0.1g，精确至0.0001g置25ml容量瓶中，用流动相稀释至刻度，作为对照品溶液，精密量取20ul注入液相色谱仪，记录色谱图。
5.计算公式对照含量％×对照品重量×样品峰面积/对照峰面积×100％= 含量（1-水分％）×样品重量6.结果判定按干燥品计算，含延胡索酸泰妙菌素不得少于98.0%相关物质测定1.仪器和用具万分之一电子天平、高效液相2.色谱条件十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂、检测波长为212nm、进样量20ul 流速：1.2ml/min 柱温：30℃3. 药品试剂3.1 6%高氯酸溶液取高氯酸8.5ml，加水至100ml，摇匀，即得。