• 伴性遗传在正交和反交中有差别。以本实验为例（X染色 体上，红眼为显性性状），正交组红眼：白眼=1：1，反 交组红眼：白眼=3：1。 P F1 正交 ww × +Y +w wY × 反交 ++ × +#43;Y ww wY ++ +Y +w wY 1 : 1 3 : 1 • 自由组合定律在正交和反交中也有差别。因为其中的一个 性状在X染色体上，遵循伴性遗传规律。
一.实验目的
• 掌握果蝇杂交的基本原理和杂交技术
• 验证和理解遗传分离定律、自由组合定 律、连锁互换和伴性遗传定律
• 学会实验数据的收集和统计处理方法 ——x2检测
二.实验原理
1.基因分离定律
孟德尔基因分离定律：有纯合显性性状的个体和具有纯 合隐性性状的个体杂交后，杂种子一代（F1）均表现相同的 显性性状，而F1自交产生杂种第二代（F2）中，表现显性 性状的个体和隐性性状的个体比例约为3：1。
七、实验中可能存在的问题
1. 需要验证三大定律，F2代果蝇数的最低数目
2. 一对果蝇的产卵数
3. 亲本需不需要做重复瓶 4. 在收集F1代时，若一次没有收集到5对雌雄蝇，如何 处理。
EY eXW EEXWY EeXWXW EEXwY EeXWY EeXwY
EeXWXw eeXWXW eeXWXw
eY
EeXWY
灰体红眼 灰体白眼 黑檀体红眼 黑檀体白眼 9 3 3 1
EeXwY
eeXWY
eeXwY
（♀︰♂=6︰3） （♀︰♂=0︰3） （♀︰♂=2︰1） （♀︰♂=0︰1）
三.实验材料
（四）三点测验 用26号雌蝇和6号雄蝇不能直接进行三点测验。 P WMSn/ WMSn ♀ （红眼长翅直刚毛） WMSn/wmsn ♀
（红眼长翅直刚毛） X
wmsn/Y ♂ （白眼短翅卷刚毛） WMSn/Y ♂
（红眼长翅直刚毛）
F1
x
如果将F1代的雌雄果蝇进行杂交，在F2代雌蝇的性状 将会全部是红眼长翅直刚毛，无法显示重组性状，因此 不能直接进行三点测验。 若将F1代雌蝇和亲本的雄蝇进行回交可进行三点测验。
灰体红眼 雌 雄
灰体白眼 雌 雄
黑檀体红眼 黑檀体白眼 总计 雌 雄 雌 雄
(O-E)2/E
利用公式
计算，由df=8-1=7，查表得到p。
P值结果讨论：
1、如果p>0.05，则理论与实际差异不显著， 偶然因素影响较大，接受无效假设，定律成 立。
2、如果p<=0.05，则理论与实际差异显著， 实验因素影响较大，接受备择假设，定律不 成立。
1. 从选择出的亲本中挑选身体状况良好的26号 雌蝇5只，6号雄蝇5只放入同一培养瓶中， 25℃培养，瓶上贴上交配类型、日期的标签。 2. 2天后将杂交瓶中所有亲本麻醉除去，25°C条 件培养。7~8天后收集新羽化的果蝇。做好实验 记录工作。
从羽化的果蝇中选择雌雄果蝇各5只放入同一培养 瓶中25°C培养。重复杂交3瓶，做好日期及培养瓶 序号标记。
♂ ♀ WMSn wmsn WMsn wmSn wMSn Wmsn
WMSn wmsn
Y
WmSn
wMsn
七.注意事项
• 准确选择处女蝇，否则无法确认雌性产出的卵是与那种性 状的雄蝇杂交的。为确保所选出的雌蝇为处女蝇可将其单 独培养2天观察是否产卵，如果没有则雌蝇为处女蝇。
• 在进行亲本杂交或F1自交一定时间后要释放杂交亲本或F1， 否则会造成回交，无法确定产出的卵是否为亲本杂交或F1 自交。
2天后将杂交瓶中所有亲本麻醉除去，继续将杂交瓶 25°C条件培养。
杂交瓶培养7~8天后开始收集新羽化的果蝇，每8 小时收集一次，深度麻醉后在解剖镜下仔细观察， 按照表型特点和雌雄分别计数，并记入表格，8天 后停止收集和计数。
五、实验结果记录表格
性状 灰体红 性别
眼
灰体白 眼
黑檀体 红眼
黑檀体 白眼
红眼雌性
红眼雄性
白眼雌性
白眼雄性
总计
O（实际频数）
E（预计频数） (O-E)2 (O-E)2/E
利用公式
计算，由df=4-1=3，查表得到p。
（三）自由组合定律
预计F2代表型中灰体红眼：灰体白眼：黑檀体红眼：黑檀体白眼=9：3：3：1 雌性：雄性=1：1
F2代表型 O（实际频数） E（预计频数） (O-E)2
1.果蝇材料 品系
6号 （雄性 亲本） 26号 （雌性 亲本）
体色 眼色 翅型 刚毛
灰体
白眼w(1) 短翅m(1)
短刚毛 sn(1) 直刚毛
黑檀体 e(1)
红眼
长翅
2.试验器具与药品
（1）仪器 隔水式恒温培养箱、高压灭菌锅、解剖镜、麻醉瓶、 培养瓶、白瓷板、毛笔、标签。
（2）试剂 培养基：蔗糖、琼脂、玉米粉、酵母粉、丙酸 乙醚、乙醇。
以果蝇X染色体上红眼（+）和白眼（w）基因为例，进行 杂交试验，可以验证这一定律。
P
红眼（X+X+）♀ × 白眼（XwY）♂
F1
红眼（X+Xw）♀× 红眼（X+Y）♂
F2
红眼（X+X+）♀ 红眼（X+Xw）♀
红眼（X+Y）♂ 白眼（XwY）♂
红眼︰白眼=3︰1 雌性︰雄性=1︰1
3.自由组合定律
11 天
亲本杂交
9 天
F1代杂交
9 天
F2代收集 观察与记录
1. 取6号（灰体白眼短翅卷刚毛）和26号（黑檀体红眼长 翅直刚毛）果蝇分别25℃培养2天，使其产卵。然后用 乙醚麻醉去除成蝇。 2. 7~8天后开始收集新羽化的果蝇，麻醉后选择26号雌 蝇和6号雄蝇并分别装在另外的培养瓶中培养待用（每 隔8小时收集一次），贴上日期和性状的标签，并做好 实验记录工作（何时何地干了什么事）。 3. 2天后观察收集的处女蝇确定没有幼虫出现。若没有则 说明雌蝇为处女蝇。
两对或两对以上不同性状的等位基因在杂合状态保持其 独立性，配子形成时，各等位基因彼此独立分离，不同对的 基因自由组合。 以果蝇灰体（E）∕黑檀体（e）和红眼（W）∕白眼（w）为 例，（果蝇的黑檀体基因位于常染色体上，白眼基因位于 X染色体上）来进行杂交试验，可以验证这一定律。
P 黑檀体红眼（eeXWXW）♀ × 灰体白眼（EEXwY）♂ ↓ F1 灰体红眼（EeXWXw）♀ × 灰体红眼（EeXWY）♂ ↓ F2 EXW EXw eXW eXw ♀ ♂ EXW EEXWXW EEXWXw EeXWXW EeXWXw
以果蝇的灰体（+）和黑檀体（e）基因为例，进行杂交 实验可以验证这一定律。
P 黑檀体（ee)♀ × 灰体（++） ♂
F1 F2 灰体（+e） × 灰体（++）灰体（+e） 黑檀体（ee） 1 ： 2 ： 1
2.伴性遗传
果蝇有X和Y两种性染色体，雌性为同配性别XX，雄性为 异配性别XY，X染色体上基因的遗传模式称为伴性遗传。
雌性 雄性
六、预期实验结果与统计学分析方法
（一）分离定律
预期F2代表型中灰体：黑檀体=3：1
F2代表型 O（实际频数）
灰体
黑檀体
总计
E（预计频数）
(O-E)2 (O-E)2/E
利用公式
计算，由df=2-1=1，查表得到p。
（二）伴性遗传
预计F2代表型中红眼：白眼=3：1 雌性：雄性=1：1
F2代表型
四、实验步骤
1、培养基的制备
A：蔗糖13克，琼脂1.3克，加水100毫升，煮沸溶解。 B：玉米粉17克，加水80毫升，混合均匀。 C:将B 慢慢倒入A中，并不停搅动混合，加热成糊状后， 再加1.4克酵母粉，混合均匀，稍冷却后加入1毫升丙酸， 调匀后即可分装到培养瓶中 。
2、实验具体操作：
选择亲本