环境微生物检测作业指导书
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一、目的：
为监控生产过程中环境、人员、器具的微生物，保证产品质量的可追溯性，制定本指导书
二、适用范围
适用于公司检验人员对环境中空气沉降菌以及操作人员手部、生产器具接触面微生物检测过程的指导
三、内容
（一）、空气沉降菌的检测方法
1、采样方法：在动态下进行，室内面积不超过30m2，在对角线上设里、中、外三点；室内面积超过30m2，分别在四个角以及四个角的对角线交叉点采样，采样时，将含灭菌凝固后的平板计数琼脂培养基的平板置采样点，放置时需离地0.8m、离墙1.2m，并避开空调、门窗等空气流通处，打开平皿盖，使平板在空气中暴露5min，盖上皿盖。

采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测，送检时间不得超过6h，若样品保存于0～4℃条件时，送检时间不得超过24h。

2、菌落培养：
（1）将准备好的平板计数琼脂培养基平板置36℃±1℃培养48±2h做空白对照试验
（2）将已采集样品的培养基在6h内送实验室，细菌总数于36℃±1℃培养48±2h，观察结果，计数平板上细菌菌落数。

3、菌落计算：
（1）、记录平均菌落数，用“cfu/皿”来报告结果。

用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5～10倍放大镜检查，不可遗漏。

（2）、若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。

4、标准要求：
（二）、食品接触面微生物检测方法
1、采样方法：适用于直接接触食品的生产设备设施；员工手部、一次性手套、工作服等食品接触面；包装卷膜、饼托、包装袋等内包材；
（1）棉签涂抹法：
A、将生理盐水以10ml分装入试管中连同包好的装入干燥平皿内的棉花团用高压灭菌器灭菌。

B、用经75%酒精棉擦拭消毒后的不锈钢镊子夹住用灭菌生理盐水浸湿的棉花团反复在内包装材料、生产器具和人员手部的表面檫拭，面积约为10c㎡，然后将带菌棉签放入有10ml生理盐水的试管中，充分振荡后作原液备用。

（2）、滤纸涂抹法：
A、将滤纸裁成5*5的正方形纸片放入干燥平皿内包好，生理盐水以50ml分装入150ml的三角瓶内，一起用高压灭菌器灭菌。

B、用经75%酒精棉擦拭消毒后的不锈钢镊子夹住用灭菌生理盐水浸湿的滤纸，正反面各在内包装材料、生产器具和人员手部的表面涂抹1min，总共面积约为50c㎡，然后将带菌滤纸放入有50ml生理盐水的三角瓶中，充分振荡后作原液备用。

2、微生物检测：
（1）、菌落总数：将原液在无菌操作下取1ml于两个平板中，再将灭菌平板计数琼脂倒入平板内并转动平皿，使混合均匀，待凝固后倒转放入生化培养箱中（36+1）℃培养（48+ 2）h，培养结束后计数两个平行平板计数琼脂培养基表面上所生长的菌落数，计算其平均菌落数，结果以cfu/cm2计。

（2）、大肠菌群：以无菌操作，将原液取1ml样液分别接种到三管灭菌的乳糖胆盐发酵管中（若接种量超过1ml选择双料乳糖胆盐发酵管），将接种好的发酵管于36℃±1℃培养24±2h。

记录所有发酵管产气管数。

结果报告按发酵管产气管数，查GB/T4789.3-2003的MPN 检索表报告每100cm2食品接触面中大肠菌群的MPN值，即MPN/100cm2；若全部阴性，结果报告填阴性。

3、标准要求：
（三）、取样频率：
1、车间转换不同卫生要求的产品时，在加工前进行采样，以便了解车间卫生清扫消毒情况。

2、全厂统一放长假后，车间生产前，进行采样。

3、产品检验结果超内控标准时，应及时对车间进行采样，如有检验不合格点，整改后再进行采样检验。

4、实验性新产品，按客户规定频率采样检验。

5、正常生产状态的采样，每周一次。

Q/XYSP-YC-006-001
环境微生物检验原始记录
检验日期：检验员：审核人：。