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致泻大肠埃希式菌的检验

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多价血清
单价血清
单价血清
单价血清
单价血清
OK多价1 O55:K59(B5) O86:K61(B7) O111:K58(B4) O127a:K63(B8)
OK多价2 O26:K60(B6) O125:K70(B15) O126:K71(B16) O128:K67(B12)
OK多价3 O44:K74(L) O114:K90(B) O119:K69(B14) O142:K86(B)


三糖铁琼脂试验:只能利用葡萄糖的细菌, 葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄,但因 量少,生成的少量酸,因接触空气而氧化, 加之细菌利用培养基中含氮物质,生成碱 性产物,故使斜面后来又变红,底部由于 是在厌氧状态下,酸类不被氧化,所以仍 保持黄色。而发酵乳糖的细菌,则产生大 量的酸,使整个培养基呈现黄色。细菌分 解含硫氨基酸,产生H2S,与FeSO4发生反 应形成FeS。
1、增菌培养 以无菌手续称取检样25 g,加在225 mL营养 肉汤中,以均质器打碎1 min或用乳钵加灭 菌砂磨碎。 取出适量,接种乳糖胆盐培养基,以测定 大肠菌群MPN,其余的移入500 mL广口瓶 内,于36±1℃培养6 h。 挑取1 环,接种于 1管30 mL肠道菌增菌肉 汤内,于 42℃培养 18 h。
大肠杆菌,能分解葡萄糖产酸产气,大多数能分 解乳糖,不产生H2S。
靛基质试验:细菌分解蛋白质中的色氨酸产 生吲哚,吲哚与对二氨基苯甲醛作用,形成 玫瑰吲哚而成红色。



脲酶试验:细菌分解尿素产生两分子氨,使培养基 pH升高,指示剂酚红显示出红色,即证明细菌有脲 酶。 动力试验:有动力的细菌会沿着穿刺线扩散生长。 赖氨酸脱羧试验:细菌从赖氨酸脱去羧基(COOH),导致培养基pH变碱,指示剂溴麝香草酚 蓝就显示出蓝色,试验结果为阳性,如果细菌不能 脱酸,培养基不变则为黄色。
5、结果报告

根据以上生化试验和血清学试验结果作出 报告。
扫描照片
三、污染途径 污染水源和土壤,进而污染食物 肉类食品 乳制品 水产品等
四、致病性

肠道内感染 腹泻、食物中毒、肠热症 肠道外感染

鼠疫(烈性传染病)、泌尿道感染、
肺炎、脑膜炎、伤口化脓、败血症
五物 、学 微检 生验
检样
乳糖发酵阳性 的发酵管
25g+营养肉汤225mL 36℃±1℃ 麦康凯 EMB 6h
致泻大肠埃希氏菌及其检验
一、目的与要求

1、学习掌握致泻性大肠埃希氏菌检验的基本原理 和方法; 2、了解动物性食品检验致泻性大肠埃希氏菌的意 义。

二、 生物学特性
俗称大肠杆菌 1、革兰氏阴性菌 2、杆状、两端钝圆、周生鞭 毛、无荚膜 3、需氧及兼性厌氧 4、能在普通琼脂上生长
普通大肠埃希氏菌Escherichia Coli
2、分离培养 将乳糖发酵阳性的乳糖胆盐发酵管和增菌 液分别划线接种麦康凯或伊红美蓝琼脂平 板; 污染严重的检样,可将检样匀液直接划线 接种麦康凯或伊红美蓝平板,于36±1℃培 养18~24 h,观察菌落。 不但要注意乳糖发酵的菌落,同时也 要注意乳糖不发酵和迟缓发酵的菌落。
EMB培养基
肠道菌增菌肉汤
36℃±1℃
18h~24h
乳糖发酵或不发酵的菌落3个~5个, 氧化酶—,革兰氏阴性杆菌 TSI、靛基质、pH7.2尿素 KCN、赖氨酸、动力 非左述的各种 反应结果 非大肠埃希氏菌
TSI底层+, H2S—, KCN—,尿素— 血清学试验
报告
(一)检验步骤 检样→样品处理→增菌培养→伊红 美蓝(EMB)平板分离培养→生化鉴定 →血清学鉴定→报告
4、血清学试验



假定试验:挑取经生化试验证实为大肠埃希菌的 琼脂培养物,用致病性大肠埃希氏菌、 侵袭性大 肠埃希氏菌和产肠毒素大肠埃希氏菌多价O 血清 和出血性大肠埃希氏菌 O157 血清做玻片凝集试 验。 当与某一种多价 O 血清凝集时,再与该多价血清 所包含的单价O血清做试验。 致泻大肠埃希氏菌所包括的 O抗原群。如与某一 单价 O 血清呈现强凝集反应,即为假定试验阳性。
菌落特征:黑紫色或紫红
色,圆形,边 缘整齐,表面 光滑,湿润, 常具有金属光 泽,也有的呈 紫黑色,不带 或略带金属光 泽。
3、生化检验



自鉴别平板上直接挑取数个菌落分别接种三糖铁 琼脂(TSI)或克氏双糖铁琼脂(KI)。同时将这 些培养物分别接种蛋白胨水、半固体、pH7.2 尿 素琼脂、KCN 肉汤和赖氨酸脱羧酶试验培养基。 以上培养物均在 36℃培养过夜。 TSI斜面产酸或不产酸,底层产酸, H2S阴性,KCN 阴性和尿素阴性的培养物为大肠埃希氏菌. TSI底层不产酸或 H2S、KCN、尿素有任何一项 为阳性的培养物,均非大肠埃希氏菌。 必要时做氧化酶实验或革蓝氏染色镜检。
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