A431,A549
西妥昔单抗
爱必妥
默克－雪
（Cetuximab） （Erbitux） 兰诺
CHO-DG44-tnfα
阿达木单抗
修美乐
雅培
（Adalimumab） （Humira）
HUVEC
贝伐珠单抗
阿瓦斯汀 罗氏
（Bevacizumab） （Avastin）
经典靶点
? 单克隆抗体的制备
? 抗体的人源化
靶点 CD20 Her2 EGFR TNFα VEGF
表达细胞
抗体药
商品名
厂家
Daudi,raji,RPMI-8226
利妥昔单抗 （Rituximab）
美罗华
罗氏
（Rituxan）
MDA-MB-231,MCF-7,SK-OV-3 曲妥珠单抗
赫赛汀
罗氏
（Trasduzumab） （Herceptin）
单抗药物工作机理： 抗体依赖性细胞介导的毒作用( antibody dependent cell-
mediated cytotoxicity, ADCC) 补体依赖性细胞毒作用( complement dependent
cytotoxicity, CDC) 中和细胞因子
单 抗 药 物 作 用 机 理
单克隆抗体药物的临床前研发
? 大分子药物——生物制药
始于1982年用重组 DNA 技术进行生物合成的人胰岛素 (rHI)
举例
激素 (胰岛素，胰高血糖素，生长激素) 造血生长因子(Erythropoietin, colony stimulating factors) 干扰素 (Interferons-α, -β, -γ) 白介素 (Interleukin-2) 疫苗 (Hepatitis B surface antigen) 肿瘤坏死因子 治疗用酶 单克隆抗体
功能鉴定： ADCC, CDC, 中和细胞因子
by抗体生产部门
by药效部门
药效筛选
ADCC—LDH release
药 效 筛 选
Herceptin
ADCC Assay on SK-BR-3 Cells with NK92-CD16A
(control)
70
60
Lysis Cell
50 40 30
来源于细菌、酵母、 昆虫、植物和哺乳动 物细胞等各种表达体 系
背景知识
临床试验 药动评价 药效筛选 单克隆抗体的制备 靶点的发现与选择
研发流程
靶点的发现和选择
集中在细胞死亡通路、血管生成、细胞周期调控信号转导 等方面
例如： CD20 :表达于B细胞和成熟B细胞，调节B细胞增殖、分化；在
95%以上的B细胞性淋巴瘤中表达 抗CD20单抗可用于治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤
EC50 ,ng/ml
Span
Avastin 25.7 101.1 -1.386 -1.8
0.04107
75.4
Pharmacokinetics, PK
药动评价 主要评估血清中药物水平，
不被肾脏清除，半衰期长；
单抗的主要代谢结果是降 解为肽段和氨基酸，无需
进行生物转化研究
Anti-drug antibodies, ADA
40 0 30 0 20 0
cell 1 0 0
%
0
1 0 -2
1 0 -1
10 0
10 1
V E G F ,n g /m l
10 2
10 3
Best-fit values Bottom Top LogEC50 HillSlope EC50,ng/ml Span
VEGF
117.7 526.2 0.6934 1.875 4.936 408.6
嵌合抗体：应用DNA 重组技 术将小鼠抗体基因上的可变区与人抗 体基因的恒定区重组, 再将重组后的 基因导入骨髓瘤细胞中表达
CDR 移植抗体（改型抗体）：进 一步用人的编码构架区( FR) 替代鼠FR, 形成更为完全的人源化抗体, 即除了3 个CDR 是鼠源的外, 其余全部是人源结 构
完全人源化抗体：1、噬菌体抗体 库技术；2、转基因小鼠技术
1 0 -1
10 0 μ g /m l
10 1
10 2
Rituxan
log(agonist) vs. response -- Variable
slope (four parameters)
Best-fit values
Bottom
6.625
Top
100.1
LogEC50
-0.5091
HillSlope
120
H U V E C n e u t r a l iz a t io n a s s a y
100
viability
80 60
cell
40
%
20
0 1 0 -4
1 0 -3
1 0 -2 c o n c.,μ
1 0 -1 g /m l
10 0
10 1
A v a s tin ####
Bottom Top LogEC50 HillSlope
Target
20 10
%0
-10
Herceptin(control) ####
log(agonist) vs. response -- Variable slope (four parameters)
Best-fit values
Bottom
0.6537
Top
31.88
LogEC50
-2.545
HillSlope
100
ellLysis
90 80 70 60
C Target %
50 40 30 20
10
0
2 0%
1 0%
5%
NHS C onc.
R it u x a n m e d ia t e d C D C o n D a u d i
1 20
Lysis
1 00 80
ell
60
C
Target
40 20
%
0
-20
评估免疫原性， 是否产生ADA
Neutralizing Anti-drug antibody, NAb
1.118
Ab Concentration, [ 10-4
10 -2
10 0
10 2
? g/ml]
EC50,μ g/ml
0.002854
药 效 筛 选
CDC--CTG
# # # m e d i a t e d C D C L y s is o n U 9 3 7 _ N H S C o n c. o p t im iz a t io n
3.069
EC50, μg/ml
0.3096
药 效 筛 选
cell proliferation and antibody neutralization
V E G F In d u c e d H U V E C P r o lif e r a t io n6 0rate 5 0 0
n
proliferatio