黄酮清除·OH能力的测定
采用邻菲罗啉法 在6个25 mL容量瓶中一次加入9 mmol/L FeSO4，9 mmol/L水杨酸各2 mL，不同浓度的黄酮粗提取溶液 1 mL，8.8 mmol/L H2O2启动反应1 h，用蒸馏水定 容，静置，于510 nm处测定吸光度 Ai。以蒸馏水为 空白，测定吸光度A0。 清除率（%）=( A0-Ai)/ A0×100% 其中：A0为空白实验的吸光度； Ai为不同浓度反应液的吸光度。
3.26 3.24
总 黄酮含量 (%)
3.22
3.20
3.18
3.16 1:20 1:30 1:40 1:50 1:60 1:70
料液比 (mL/g)
图3 料液比与总黄酮含量的关系曲线 由图3可知：随着料液比的提高，黄酮得率上升，但超过1:30 后上升趋势不明显，料液比为1:30最好。
提取时间对提取率的影响
黄酮清除O2-· 自由基能力的实验结果
28 26 24 22 20 18 16 14 0.0 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
由图5可知：在实验浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对清 除O﹣2·自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
清除率 (%)
图5 提取浓度与清除率的关系曲线
黄酮清除· OH自由基能力的实验结果
2.实验部分
黄酮的提取工艺
采用乙醇热回流法提取。 工艺流程： 骨碎补粉碎→过筛（40目）→石油醚脱酯→ 乙醇热回流提取→过滤→滤液浓缩→总黄酮提取 液
乙醇浓度对提取率的影响 单 因 素 实 验 提取温度对提取率的影响 料液比对提取率的影响 提取时间对提取率的影响
正交试验设计
为了全面考查影响因素，设计了4因素3水平 的正交试验，试验因素水平见下表：
20 18 16
清除率 (%)
14 12 10 8 6 0.0
0.2
0 提取浓度与清除率的关系曲线 由图6可知：在一定的浓度范围内，骨碎补中黄酮类化合物对 清除·OH自由基的效果随黄酮浓度的增加而加强。
4.结论
（1）采用乙醇热回流提取法，从骨碎补中提取总黄 酮。 （2）在单因素实验基础上，通过正交试验设计，研 究得到骨碎补中总黄酮提取的最佳工艺条件：乙 醇浓度60%、料液比1:30、提取时间 3 h、提取温 度 60 ℃。在此条件下，用紫外分光光度法测得总 黄酮的含量为3.51%。 （3）测定黄酮对自由基的清除能力来研究骨碎补中 总黄酮抗氧化活性。并且骨碎补中黄酮类化合物 在实验浓度范围内清除O2-·、·OH效果都随黄酮 浓度的增加而加强。
3.实验结果与讨论
乙醇浓度对提取率的影响
3.30 3.25
总 黄酮含量 (%)
3.20
3.15
3.10
3.05 40 50 60 70 80 90
乙醇浓 度 (%)
图1 乙醇浓度与总黄酮含量的关系曲线 由图1得知:随着乙醇浓度的增加，黄酮的得率升高。当浓度 大于60％时，得率的有所降低。故最佳乙醇浓度为60％。
报告内容
CONTENTS
研究背景及意义 实验部分
结果与讨论
结论
1.研究背景及意义
黄酮类化合物是一类分布很广的多酚类天然 产物，几乎存在于所有的绿色植物中，具有多种 明显的药理活性。 目前对骨碎补总黄酮的研究主要在抗炎、抑 制疼痛等方面。同时黄酮也是一种很强的抗氧化 剂，可有效清除体内的超氧阴离子自由基，这种 抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻 止癌症的发生。
骨碎补总黄酮的抗氧化活性研究
黄酮清除O2-· 自由基能力的测定
采用邻苯三酚自氧化法 取 50 mmol/L Tris-HCI 缓冲溶液(pH=8.2)4.5 mL ，与 4.1 mL 蒸馏水混匀后在 25 ℃水浴中保温 20 min ，分别加入 0.1 mL 的不同浓度的黄酮样品液， 取出后立即加入在 25 ℃预热过的 3 mmol/L 邻苯三 酚 0.3 mL ，迅速摇匀后倒人比色杯， 420 nm 下测 定吸光度A i 。以蒸馏水为空白作为对照，测定吸光 度A0 。 清除率的计算： 清除率（%）=( A0-Ai)/A0×100% 式中：A0以蒸馏水为空白实验的吸光度； Ai为加入不同浓度黄酮粗提取液的吸光度。
提取温度对提取率的影响
4.0
3.5
总 黄酮含量 (%)
3.0
2.5
2.0
40
50
60
70
80
90
提取温度 (℃)
图2 提取温度与总黄酮含量的关系曲线
由图2可知：40℃到60℃总黄酮含量有较大的增长, 但60℃到 90℃黄酮含量减小。而60 ℃时总黄酮含量最大。故最佳提取温度 为60℃。
料液比对提取率的影响
比较左表中 4 因素的 R 值的大小，可以看出A因素， 即乙醇浓度为最重要因素。 四因素对黄酮提取量影响 的主次顺序为乙醇浓度>浸 提时间 > 浸提温度 > 料液比， 并且最佳的提取工艺条件 为：乙醇浓度 60% 、料液 比1:30、提取时间3 h、提 取温度 60 ℃，即 A 1 B 2 C 3 D 2 。
3.3 3.2 3.1
总 黄酮含量 (%)
3.0 2.9 2.8 2.7 2.6 2.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5
提取时 间 (h)
图4 提取时间与总黄酮含量的关系曲线 由图 4 可知：黄酮含量随着提取时间的增加而增大，当超过 3 h时，总黄酮含量反而降低。故选用3 h为宜。
正交试验结果