实验七、细菌的显微观察（形态、大小）
一、实验目的和内容
目的：1.了解油镜的原理和使用方法。

2.掌握细菌形态观察的基本方法。

3.了解细菌的基本形态特征。

内容：1.学习显微镜（油镜）的使用方法。

2.学习细菌涂片和简单染色法。

3.用油镜观察枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌染色装片。

二、实验原理
油镜的放大倍数可达100Χ，但其焦距和直径很小，需要很大的光照强度。

由于空气和玻璃的折射率不同，如果是镜与装片之间介质为空气时会发生折射，降低视野的照明度，而香柏油的折射率与玻璃相近，光线不会发生折射从而提高视野的照明度和分辨率。

单染色是用单一染色剂对细菌进行染色的方法。

由于细菌在中性、弱酸性或碱性溶液中带负电荷，碱性染料在电离后染色离子带正电荷，因此使细菌着色。

常用的染料有美篮、碱性复红、结晶紫、孔雀绿等。

三、实验材料和用具
（1）菌种：培养12-16h的苏云金杆菌（Bacillus thuringiensis）或者枯草杆菌（Bacillus subtilis），培养24小时的青枯假单胞杆菌。

（2）染色液和试剂：吕氏碱性美蓝染液(或草酸铵结晶紫染液)，石炭酸复红染液、结晶紫、鲁哥尔碘液、95 %酒精、复染剂（蕃红）、二甲苯、香柏油。

（3）器材：废液缸、洗瓶、载玻片、接种杯、酒精灯、打火机、记号笔、擦镜纸、显微镜。

四、实验内容及步骤
1、实验内容：
（1）细菌单染色：分别制备标号为1、2及同学自己分离的细菌玻片并染色；
（2）口腔内微生物形态观察
2、实验步骤：
清洗载玻片中心加半滴水无菌操作取菌涂布于水中（1cm左右）干燥火焰固定染色（1min）水洗吸水晾干显微镜下观察、记录图示/描述各菌形状
五、实验小结
（1）如何正确操作油镜？怎样维护显微镜？
（2）制片过程中要注意什么？
（3）如果涂片未经热固定，将会出现什么问题？加热温度过高、时间太长，又会怎样呢？
（4）为什么要求制片完全干燥后才能用油镜观察？。