将抗原成分吸附于硝酸纤维素上，与待测抗体 反应后，进行化学二级色。
较免疫印迹法更为敏感。
所呈现的抗体没有分子量的概念。
Array－ELISA
Plate-Based Multiplex Assay System
Array
ELISA
Array－ELISA
自身免疫病ENA抗体
ENA抗体检测结果( Array-ELISA)
抗其他细胞成分抗体（高尔基体，中心体，纺锤体，线粒体，溶酶体，
肌动蛋白，Vimentin，细胞角蛋白，Lamin)
ENA的特点
ENA又称为可提取性核抗原，是核物质中一 类蛋白的总称。这类核蛋白不含有DNA，组蛋 白，可以用盐水进行提取，所以被称为可提取 性核抗原。
ENA抗原可以从多种组织中获得，各种来 源的ENA没有种属间的差异，但是有明显的组 织不均一性。
ENA对RNA酶和温度敏感。
抗ENA抗体检测方法
对流免疫电泳法( CIE) 免疫双扩散法(ID or DID) 免疫印迹法(IB) 斑点免疫印迹法(IB) 酶联免疫吸附法(ELISA) 蛋白芯片（Protein chip）
对流免疫电泳(CIE)结果判断
免疫双扩散(ID)
0.5% 琼脂糖 0.01M PH7.4磷酸盐缓冲液
Sm:28/29,13.5KD U1-RNP:73,32,17.5KD
IBT结果判断
38KD 16.5KD 15KD rRNP:38,16.5,15KD
52KD 45,47,48KD
86KD 70KD
抗可提取性核抗原（ENA）分子量 anti-extractable nuclear antigen antibodies
风湿免疫病的实验室检测
中国医学科学院中国协和医科大学 北京协和医院风湿免疫科
前言
风湿免疫病患者体内存在着许多自身 抗体。它们对疾病的诊断，治疗，预后 判断乃至基础研究都具有极其重要的价 值。因此开展对这些抗体的实验室检测 就成为临床医师诊疗过程中必须要使用 的一种手段。了解这些检测的过程和方 法无疑对临床工作是非常必要和重的。
抗核抗体谱（ANAs）分类
抗DNA抗体（anti-dsDNA，anti-ssDNA ）
抗组蛋白抗体（histons: H1 , H2A , H2B , H3 , H4 , H2A-H2B复合物）
抗ENA抗体（抗体: Sm , nRNP , SSA/Ro , SSB/La,
rRNP , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , RA33 ,
2.5mm角膜钻 已知Ab
1:64 1:1待测血清
湿盒
U1-RNP
Ag
1:16
SSA
1:4 Sm
已知Ab
SSB
免疫双扩散(ID)检测结果判断 上图为抗Sm、U1-RNP抗体阳性 滴度均为1:4
下图为抗SSA、SSB抗体阳性 抗SSA抗体滴度1:64 抗SSB抗体滴度1:16
对流免疫电泳的特点：简便，快速， 敏感度较双扩散提高10-15倍。
Sm RNP SS-A SS-B Scl-70 Jo-1 Image
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抗可提取性核抗原（ENA）抗体 anti-extractable nuclear antigen antibodies
ANAs 抗非组蛋白抗体
Ku,RANA,Mi-1,Mi-2,PL-7,PL-12.）
抗着丝点抗体（ anti-CENP -A , B , C ，D，F，G）
抗核仁抗体（抗体: RNA-polymerase-1 , PM-Scl/PM-1，Th/To,
U3nRNP/Fibrillaria，4-6-S-RNA）
自身抗体检测的临床意义
早期诊断和分类弥漫性结缔组织病 指示疾病活动性、预后 可能预示自身免疫病， 提示预防
抗核抗体的概念
抗核抗体（ANA）是临床应用最多的自 身免疫标志。
传统定义：抗细胞核抗原成分的自身抗 体的总称（DNA，RNA.，蛋白质，脂类， 酶类等分子复合物的抗体）。
目前认为： 抗 核酸（nucleic acid)和核 蛋白(nucleoprotein)抗体的总称。
缺点：当存在两种或两种以上抗体时， 无法准确判断，因此只能用于做筛选试验。
免疫双扩散法是抗ENA抗体检测中最 经典的方法，其操作简单，不需要特殊设 备，结果特异性高，重复性好是进行抗 ENA抗体检测的金方法。
免疫印迹法（IBT）
IBT法的原理：利用蛋白质的电泳现象,将经过 SDSPAGE 分离的蛋白质从凝胶上转移到固相支持体上（硝 酸纤维素膜 NC ）。 待测的抗体与附着于固相支持体上的靶蛋白所呈现 的抗原表位 发生特异性结合，经过二级染色以达到检测 与鉴定的目的。
结缔组织病 干燥综合症 肌炎/皮肤炎 系统性硬化病 系统性血管炎
原发性胆汁性 肝硬变
ANA SSA/SSBab SSAab M3Rab Jo-lab Mi-2ab SRPab （合成酶抗体） Scl-70ab ACA 核仁型ANA ANCA-PR3 ANCA-MPO ENCA （内皮细胞抗体） AMA AMA-M2ab 核包膜ab
Sm : nRNP： SSA： SSB：
SCL-70: Jo-1：
rRNP
28/29, 13.5KD 73，32，17.5 KD 52，60 KD 45，47，48 KD
86,70KD
55 KD 38，16.5，15 KD
酶联免疫吸附法(ELISA)
斑点印迹法
ENA抗原来源为纯化和分子克隆后重组的蛋白。
什么是自身抗体
自身抗体是自身免疫性的标志。
自身抗体是易感者（易感基因）在环境因素 （病毒等）诱导下对自身组织或成分的异常免 疫反应。
自身抗体的存在、自体免疫反应与自身免疫性 疾病并不同义是一个重要的概念。需要进一步 研究。
自身抗体是自身免疫性风湿病（ARD） 的生物标记（Bio-marker）
经热变性的多组分蛋白质通过上述过程，保持其生物活 性不变，将抗ENA抗体的检测提高到分子多肽的水平并 提高了检测的敏感性和特异性。
要点：检测者需要了解检测的原理，熟知抗原表位的分 布及形态，不易准确掌握。
免疫印迹法（IBT）垂直电泳装置
免疫印迹法（IBT）电泳转印仪
73KD
32KD 28/29KD 17.5KD 13.5KD