“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递 符合孟德尔遗传规律。 ②若该转基因植株自交，则其后代中抗卡那霉素型与卡 那霉素敏感型的数量比为___3_:_1__。
4、目的基因的检测与鉴定
为什么非要有载体和目的基因一同进入受体细胞呢？
研究发现，单个基因或DNA片段导入另一生 物体的细胞后，往往会被细胞内的防御系统消 灭掉，这样就大大降低了目的基因的表达效率； 如果把目的基因包装一下，就很容易逃过受体 细胞的防御系统，免遭“灭顶之灾”。
基因工程：把一种生物的某种基因提取出来，加以 修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向的改造生 物的遗传性状。
（3）C过程的培养基除含有必要营养物质、琼脂和激素
外，还必须加入_卡__那__霉__素__。 （4）如果利用DNA分子杂交原理对再生植株进行检测，D
过程应该用 放射性同位素（或荧光分子）标记的抗虫基因作为
探针。
“汉水丑生 的生物 同行”
超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制
作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
课件为公益作品，版权所有，不得以 任何形式用于商业目的。2012年1月15 日，汉水丑生标记。
（２）进行过程②时，需用 胰蛋白 酶处理贴附在培养 皿壁上的细胞，以利于传代培养。
“汉水丑生的生物同行”超级群大型公 益活动：历年高考题PPT版制作。本
课件为公益作品，版权所有，不得以 任何形式用于商业目的。2012年1月15 日，汉水丑生标记。
四 目的基因的检测与表达产物的测定
基因工程的概念
基因工程又叫基因拼接技术或DNA重组技术。通俗 的说就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取 出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里， 定向的改造生物的遗传性状。
供体 细胞
目的 基因
受体 获得新 细胞 性状
基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将表达载体导入受体细胞
（1）A过程需要的酶有_限__制__性__内__切__酶__和__D_N_A_连__接__酶____。
（2）B过程及其结果体现了质粒作为运载体必须具备的
两个条件是具有标记基因；能在宿主细胞中复制并稳定保。存
“汉水丑生 的生物 同行”
超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制
作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
若要在体外获得大量反转录产物，常采用 PCR 技术。 （5）基因工程中除质粒外， 噬菌体 和 动植物病毒等 也可 作为运载体。
（6）若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用 未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是
未处理的大肠杆菌吸收质粒（外源DNA）的能力极弱
（1）从小鼠中克隆出β-珠蛋白基因的编码序列（cDNA）。 （2）将cDNA前接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上
两种生物的互补的DNA单链能够在一定条件下结合成双链。 即能够进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补 配对进行。因此，当用探针与转基因生物的目的基因杂交时， 如果出现杂交带（用特殊的显影装置能看到），则说明目的 基因已经插入受体细胞的染色体DNA中。
基因探针：
是一小段单链的DNA或RNA,带有放射性同位素标记， 并能与目的基因的一条链碱基互补配对
又如：有的基因工程产品需要与天然产品的功能 进行活性比较，以确定转基因产品的功能中否与天然 产品相同，甚至超过天然产品。
目的基因的检测与鉴定 ——检查是否成功
①检测转基因生物染色体的DNA上是否插 入了目的基因 ——DNA分子杂交
1.分子检测 ②检测目的基因是否转录出了mRNA ——分子杂交
③检测目的基因是否翻译成蛋白质 ——抗原-抗体杂交
2.基因表达载体的组成
启动子 终止子
目的基因 标记基因
复制原点
基因工程的概念
把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放 到另一种生物的细胞里，定向的改造生物的遗传性状。
供体 细胞
目的 基因 的获 得ຫໍສະໝຸດ 基因 表达 载体 的构 建
将目 的基 因导 入受 体细 胞
筛选 含有 目的 基因 的受 体细 胞
归纳: 基因工程的基本操作程序构建基因表达载体
目的基因、启动子、终止子、标记基因、复制原点
3. 将目的基因导入受体细胞
农杆菌转化法、花粉管通道法、基因枪法；显微注 射法；氯化钙法
4. 目的基因的检测与鉴定
检测：是否插入、转录、翻译、个体水平的检测
抗四环素的基因，构建成一个表达载体。 （3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有
四环素的培养基上培养大肠杆菌。如果表达载体未进入大 肠杆菌中，大肠杆菌会因不含有抗四环素基因而死掉；如 果培养基上长出大肠杆菌菌落，则表明β-珠蛋白基因已 进入其中。 （4）培养进入了β-珠蛋白基因的大肠杆菌，收集菌体，破碎 后从中提取β-珠蛋白。
“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
请据图回答： “汉水丑生的生物同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
2.β-珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成分异 常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症。假如 让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β-珠蛋白， 想一想，应如何进行设计？
（2012福建）32．现代生物科技专题 肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引 发肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细 胞实现表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技 术基本流程如图１。
“汉水丑生的生物同行”超级群大型公 益活动：历年高考题PPT版制作。本 课件为公益作品，版权所有，不得以 任何形式用于商业目的。2012年1月15 日，汉水丑生标记。
（１）进行过程①时，需用 限制性核酸内切酶（_或__限__制__）___ 酶切开载体以插入let-7基因_。载体应有RNA聚合酶识别和结合 的部位，以驱动let-7基因转录，该部位称为 启动子 。
从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体（对抗进 行同位素标记）进行抗原——抗体杂交；如果出现杂 交带，表明目的基因已形成蛋白质产品。
2.形态检测:检测转基因生物是否表达出相应的性状 ——目标性状或标记基因的性状
如：一个抗虫或抗病的目的基因导入植物细胞后， 是否具有了抗虫或抗病特性，需要做抗虫或抗病的 接种实验，观察害虫的存活情况或植物的患病情况 以确定是否具有抗性及抗性的程度。
“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
（5）科学家发现转基因植株的卡那霉素抗性基因的传递 符合孟德尔遗传规律。 ①将转基因植株与___非__转__基__因__植__株_____杂交，其后代中 抗卡那霉素型与卡那霉素敏感型的数量比为1：1。
（2012福建） 32．现代生物科技专题
肺细胞中的let-7基因表达减弱，癌基因RAS表达增强，会引发
肺癌。研究人员利用基因工程技术将let-7基因导入肺癌细胞实验
表达，发现肺癌细胞的增殖受到抑制。该基因工程技术基本流程如
图１。
“汉水丑生的生物同行”超级群大型公 益活动：历年高考题PPT版制作。本
（３）研究发现，let-7基因能影响癌基因RAS的表达，其影响
机理如图２。据图分析，可从细胞中提取 RNA 进行分子杂交，
以直接检测let-7基因是否转录。肺癌细胞增殖受到抑制，可
能是由于细胞
RAS（蛋R白ASmRNA/RAS蛋白）含量减少引起
的。
（4）反转录作用的模板是 mRNA（或RNA），产物是cDNA （。或 DNA）
的细胞才能在卡那霉素培养基上生长。下图为获得抗
虫棉的技术流程。
“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
“汉水丑生 的生物 同行” 超级群大 型公益 活动： 历年高考题PPT版制 作。本课件为公益作 品，版权所有，未经 允许不得擅自修改或 用于任何形式的商业 用途。2012年1月 15日， 汉水丑生标记。
体细胞是否具有青霉素抗性来判断受体细胞是否获得了
目的基因。重组DNA分子进入受体细胞后，受体细胞必
须表现出特定的性状，才能说明目的基因完成了表达过
程。
标记基因的作用在于便于检测目的基因的情况。 因为标记基因和目的基因同位于运载体上，要导入都 导入，要表达则都会表达。一般标记基因的DNA序列是 已知的，若选用抗氨苄青霉素基因，则可在目的基因 导入后用氨苄青霉素来处理受体细胞，若无异常，则 抗氨苄青霉素已合成，说明基因已得到表达。
前面三个步骤完成后，在全部的受体细胞中，真正能够 摄入重组DNA分子的受体细胞是很少的。因此，必须通 过一定的手段对受体细胞中是否导入了目的基因进行检 测。
检测的方法有很多种，例如，大肠杆菌的某种质粒
具有青霉素抗性基因，当这种质粒与外源DNA组合在一