分别从伤害和未伤害处理的马铃薯叶片中提取
总 MCP$反转录后$取%(W5ACP 为模板用 K% 和 K! 引物扩增)同时$选用一 对 看 家 基 因 延 伸 因 子 Gc%H 9%%F&的 引 物 !K# P;PLLPLLPP;>PL>PL>;LPL 和 K$LLPLLPP>L>>)>PLPLP>LL"作 为 内 参 ) EFK!6%$!7<0 的表达载体构建
用 KLM 方法从二倍体马铃薯NOK%&%!(/01-2349:制剂#
的 5ACP 和 ACP$命名为 ;%<#=!>) 测 序 表 明$;%<#=!> 基 因 组 ACP 全 长 ’I&2,$含 有 一 个 %%’2, 的 内 含 子$
文 章 编 号 !&!’#SE""!!!&&’"&#S&$%"S&F
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%!材料和方法
EFE! 植 物 材 料 二倍 体 马 铃 薯 种 NOK%&%%%$&!(/01-2349:27*=
,+1"由黑龙江省农 业 科 学 院 克 山 马 铃 薯 研 究 所 盛 万
民研究员提供)出 苗 一 个 月 时$采 取 部 分 叶 片 用 液
氮 冷 冻 后 保 存 于 SI&_ 冰 箱 作 为 对 照 ) 对 剩 余 叶 片 进 行 伤 害 处 理 $用 刀 片 划 破 植 株 上 部 幼 叶 边 缘 $不 伤
表明$;%<#=!> 的 BMCP 在叶片中具有强烈的伤害诱导表 达 特 性)同 时$构 建 了 分 别 以 水 稻 ’?5$ 启 动 子 和 玉 米
@6+启动子驱动;%<#H!> 基因的双元载体)
关键词!二倍体马铃薯!(/01-2349:27*,+1"(蛋白酶抑制剂 # (伤害诱导
中 图 分 类 号 !RE$#! ! ! 文 献 标 识 码 !P! ! !
(TR8:;HU+:$VTW89:;$UPC)*?8HX+$VPC789:HY8:
!<15+/-10A*BC16/715/7B/DE7/9F*-*5+?81-GF*7390183"-:1-?*3*-5$H+1-.82;01-5F*-*"-.+-**7+-.E*-5*7$ <1-,+-.’.7+?2052710@-+I*78+5B$<1-,+-.!%&&E’$E:+-1"
迄今 为 止$已 有 不 同 学 者 从 马 铃 薯 *番 %E$%&& 茄 等 %%%& 材 料 中 克 隆 了 马 铃 薯 ;%<# 基 因$但 从 马 铃 薯中克隆 该 基 因 利 用 的 都 是 四 倍 体 马 铃 薯 栽 培 种
!(/01-234526*7/823"$却 没 有 利 用 占 马 铃 薯 资 源 约"$Q的二倍体种)与四倍 体 马 铃 薯 相 比 较$二 倍 体马铃薯 具 有 更 好 的 抗 虫 性 和 更 为 丰 富 的 抗 虫 资 源 ) %%!$%#& 这种 抗 虫 性 与 其 携 带 的 蛋 白 酶 抑 制 剂 基 因是否有关+ 不 同 类 型 马 铃 薯 的 ;%<# 基 因 间 是 否存在差异+这种差异是否影响它们的抗虫性+为 了系统的研究这些 问 题$就 必 须 有 不 同 马 铃 薯 种 的 ;%< # 基 因) 本 文 以 二 倍 体 马 铃 薯 种 NOK%&%%%$& !(/01-2349:27*,+1"为 材 料$克 隆 并 分 析 了 马 铃 薯 蛋白酶 抑 制 剂 # 基 因 ;%<#H!>$同 时$分 别 将 水 稻 ’?5$启动子和玉米 @6+启动子驱动的;%<#H!> 基 因构建进双元载体)
收稿日期 !!&&$ &$ #&"修回日期!!&&$ &’ !& 基金项目 !江苏省科技厅项目!编号#()!&&%#&’"%*+,,-./0123,.-405/-6789:;<+*580:50 = >05?:-@-;3A0,9./B0:/!C-D()!&&%#&’"& 作者简介 !卜庆云!%E"F’"$男$博士生(研究方向#植物基因工程 通讯作者 !杨世湖$教授$博士生导师 )GHB98@#39:;<?$&E"39?--D5-BD5:(>0@#&!’HI$#EF’%F
与 (/不同$蛋 白 酶 抑 制 剂 不 是 毒 性 蛋 白$其 抗 虫性是由于它能与昆虫肠道内起消化作用的蛋白酶
相互作用并使之失 去 消 化 活 性$昆 虫 取 食 后 因 缺 乏 营养而滞育或死亡 所 致$因 而 昆 虫 不 容 易 对 它 产 生 抗 性 ) 同 时 $这 类 蛋 白 原 本 就 是 人 类 食 品 的 成 分 $其 转基因植物产品对人*畜等没有任何安全性 问 题 ) %%& 最新研究还表 明$马 铃 薯 KNC# 蛋 白 还 有 抗 癌 和 抗 炎的效果 ) %I& 因而克隆和研究蛋白酶抑制剂基 因 不 仅有理论意义$对当 前 农 作 物 抗 虫 基 因 工 程 研 究 也 具有实用价值)
害叶脉$每!$?处 理 一 次$连 续 #1$取 受 伤 幼 叶 用 液 氮 冷 冻 后 保 存 于 SI&_ 冰 箱 备片的总 MCP 5ACP@82.9.35-:</.+5/8-:J8/均购自 L@-:/05? 公司) 用试剂盒 纯 化 的 BMCP 为 模 板 经 ,.8B0.0\/0:<8-: 程序合成5ACP 并与 %>/.8,NG\! 载 体 连 结) 噬 菌 体 包装提 取 物 Y9\K9\>Y W9B219,95J;8:;G\/.95/购 自 G,850:/0./05?:-@-;80<公司)自配试剂和各项操 作均严格按各公司说明书进行)
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遗!传 !"#"$%&’( !)*+,+-."!&&’!!!!!!!!!!!!!!!!!"卷!