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一 HIV-1 life cycle
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二 HIV-1基因结构
gag, -----群抗原基因，编码核心蛋白p24 • pol -----多聚酶基因，编码多聚酶； • env-----包膜蛋白基因，编码包膜蛋白gp120 及gp41； • tat ----- 基因反式激活因子对HIV-1基因其正调控作用 • rev,----- 病毒蛋白表达调节因子，能增加gag和env基因对结构蛋白的表达 • vif,----- 病毒感染因子, 其作用是在一些细胞因子的协下促进HIV-1在细胞内复 • Vpr,----- R蛋白能使HIV在巨噬细胞中增殖 • vpu,----- U蛋白，能促进HIV从细胞膜上释放 • nef,----负因子，具有抑制HIV-1增殖作用
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Introduction
慢病毒（Lentiviruses）属于逆转录病毒科。慢病毒核蛋 白质前整合复合物具有噬核特性，病毒基因组运输至细胞核， 从而使慢病毒可以感染和在非有丝分裂细胞中复制。这一特性 使慢病毒成为基因治疗的转移载体。 HIV （Human immunodeficiency virus） 、EIAV （Equine infectious anemia virus） 、 FIV （Feline immunodeficiency virus） 、 SIV （ Simian immunodeficiency virus） 。其中研究最多最为透彻的 是HIV。
concentration & titration 1. HIV-1-Derived lentiviral vector production & titration 2.HIV-1 Vector Production----Supernatant recoveries & concentrat 六.The difference of Packaging Cells for LVV with other retroviruses 七.The Development of LV Vectors 八.Advantages and Disadvantages of Lentiviral vectors 九.The comparison of Lentiviral vectors with other vectors
• 载体部分与包装成分互补,仅含有包装、逆转ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ和整合所需的HIV-1顺式作 用元件,同时具有异源启动子控制下的MCS及在此位点插入的目的基因。
接下来将以 HIV为例从以下方面说明慢病毒载体构建方面 的基础知识：
一. HIV-1 life cycle 二. HIV-1基因结构和病毒颗粒结构 三.载体系统构建的基本原理 四.载体系统的设计 五.包装系统的设计 ----- HIV-1-Derived lentiviral vector production ,
Fig.1 慢病毒载体的顺式作用元件
四 载体系统的设计 文档仅供参考，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。
• 慢病毒载体系统由三种不同的组成部分：包装结构、转移载体成分和包膜 蛋白成分（Env表达结构）。
• 包装部分由去除了包装、逆转录和整合所需的顺式作用元件的HIV-1基因 组而构建,能反式提供产生病毒颗粒所需的蛋白;
• Non-primate – Feline immunodeficiency virus (FIV) – Equine infectious anemia virus (EIAV)
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The outline of this ppt
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Lentiviruses life cycle
慢病毒通过病毒衣壳糖蛋白与细胞膜上的特异受体结合而 进入易感靶细胞。一旦与细胞膜上的特异受体结合，慢病 毒膜和细胞膜融合后病毒核心释放入细胞浆里。病毒RNA 逆转录合成双链线性DNA而转运之细胞核。线性病毒 DNA永久性的整合入染色体DNA（宿主基因组）中，形 成前病毒，成为永久的遗传成分，在细胞周期中与靶细胞 基因一样进行复制，转给子代细胞。前病毒DNA转录成 RNA后再转运至胞浆，在胞浆里RNA翻译成病毒蛋白。病 毒前结构蛋白和复制酶与病毒RNA组装成新的病毒核心， 从包装细胞获得病毒包膜蛋白后以出芽的方式从细胞膜上 释放出。病毒前结构蛋白经进一步处理而最终形成成熟的 具有感染性的子代病毒颗粒。这些特性是慢病毒成为基因 治疗转运工具的重要原因 。
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二 HIV-1病毒颗粒结构
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三 载体系统构建的基本原理
• HIV-1基因组中如包装信号、长末端重复序列的顺式作用元件与编码 反式作用蛋白的序列进行分离。即从病毒基因组中将反式gag, pol, and env基因(其他辅助基因省去)从病毒中分离出而用我们感兴趣的外源性 目的基因代替，剩下的顺式作用元件在病毒复制周期中------逆转录、 整合、转录和包被--------可以被其它病毒或细胞蛋白识别。
Mitrophanous K, Gene Ther 5(11):1481–1487(1999)
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Lentiviral Vector Systems Under Development
• Primate – Human immunodeficiency virus (HIV) – Simian immunodeficiency virus (SIV)