第一节:细胞形态结构的观察法
一、光学显微镜技术
①光学显微镜种类:普通光学显微镜技术、相差和微分干涉显微镜技术、荧光显微镜技术、激光扫描共焦显微镜技术、荧光共振能量转移技术、荧光漂白恢复技术;
二、电子显微镜技术
(1)电子显微镜的基本知识:
①电子显微镜分辨率高的原因:使用了波长比可见光短得多的光源;
②电子显微镜与光学显微镜的区别:
光源分辨率透镜真空成像原理
光学显微镜可见光200nm 玻璃透镜不要求真空样品对光的
吸收
电子显微镜电子束0.2nm 电磁透镜高真空样品对电子
的散射和透
射
③电子显微镜样品处理:
第一种常规流程:固定→包埋→超薄切片→染色
染色:某些精细结构可采用复染色技术。
(重金属盐染色)
第二种流程(冷冻蚀刻电镜技术):快速低温处理→样品低温断裂→喷镀铂\金+碳(形成碳膜)→消化液消化样品→电镜观察碳膜上留下的痕迹及细胞断裂面结构
此方法适用于观察胞质中细胞骨架纤维及其结合蛋白。
(2)扫描电镜技术
扫描电镜与普通电子显微镜的明显区别:立体感更强
二者区别:
①成像原理:扫描电镜利用的是样品激发的二次电子,而不是直接散射光源
②样品处理:扫描电镜为了使样品有良好的导电性,需要观察前喷镀一层金膜,
而且为了降低在样品干燥时水的表面张力对样品表面结构的影响,
需要用液态CO2进行处理再干燥。
(原理p63)。