FL2 MFI FL2 MFI FL2 MFI
IL- 5
IL-10 10000
1000
TNF- 100
Il-4 10000
1000
100
Il-2 10000
1000
100
IFN-
10
1
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1000
10000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
流式的基本原理 流式检测细胞因子 CBA技术的应用
一个细胞的全面研究
Cell Vol. 132, January 25, 2008
什么是CBA?
CBA是利用一系列荧光强度不同的微球，同时分析 样本中多种可溶性成分的流式检测方法。每个CBA 微球有特定的荧光强度，大小一致，包被有特异性 抗体，提供了捕获表面，有效捕获待测蛋白，再加 入荧光标记（PE）的检测抗体，形成“三明治”夹 心复合物进行检测。
1000
100
TNF-
10
IFN-
1
1
10
100
1000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
A = 1.26 B = 5.00 C =3.60 D = 3.89 R^2 = 0.9973
可检测的样本种类多样
各种细胞（如外周血，骨髓，细针穿刺，灌洗液，实体组 织，悬浮或贴壁培养的细胞），微生物，人工合成微球等
流式细胞仪的检测范围
细胞结构
• 细胞大小 • 细胞颗粒度 • 细胞表面积 • 核浆比例 • DNA含量与细胞周
期 • RNA含量 • 蛋白质含量 • ……
细胞功能
• 细胞表面/胞浆/核的特异性抗原 • 细胞活性 • 细胞内/外的细胞因子 • 激素结合位点、细胞受体 • 蛋白磷酸化 • pH值 • 钙离子浓度 • 细胞膜电位、线粒体膜电位 • ……
• 多重分析 • 节约样本 • 灵敏度高
CBA原理
Capture Ab
+
Capture Bead
+
Analyze of Interest
Fluorescent Detector Ab- PE
一系列荧光强度不同的微球包被有特异性捕获抗体，
与待测样本孵育后，形成“三明治”复合物。
CBA原理 +
Bead Intensity
Human Th1/Th2 Cytokine CBA –标准曲线
5000 pg/ml 2500 pg/ml 1250 pg/ml 625 pg/ml
IL-2
IL-4
312 pg/ml
80 pg/ml
20 pg/ml
IL-5
IL-2 IL-4 IL-5
FL2 MFI FL2 MFI FL2 MFI
IL-10IFN-g
TNF-a 10000
1000
100
10
10000
1
1
10
100
1000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
A = 1.29 B = 4.24 C =3.43 D = 4.33 R^2 = 0.9991
A = 1.31 B = 3.86 C =3.30 D = 4.45 R^2 = 0.9980
10
1
1
10
100
1000
10000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
细胞因子的检测与应用 暨BD CBA技术简介
苏州市跃亚生物技术有限公司 赵寅岗
流式的基本原理 流式检测细胞因子 CBA技术的应用
流式细胞术定义
流式细胞术（Flow Cytometry, 简称FCM）是一种可以快
速、准确、客观，并且能够同时检测直线流动状态中的单个 细胞的多项物理及生物学特性，加以分析定量的技术。
A = 1.31 B = 3.77 C =3.37 D = 4.77 R^2 = 0.9997
10
1
1
10
100
1000
10000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
IL- 10 10000
1000
1ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ0
10
10000
1
1
10
100
1000
10000
Concentr ation (pg/m l)
Curve-Fitting Model: 4-Parameter Logistic y = ((A - D)/(1 + (x/C)^B)) +D
A = 1.34 B = 4.11 C =3.42 D = 4.45 R^2 = 0.9987
流式细胞仪（Flow Cytometer）集激光技术、电子物理
技术、光电测量技术、电子计算机技术、细胞荧光化学技术 、单克隆抗体技术为一体的一种新型高科技仪器。
BD Accuri C6
流式细胞术原理
流式细胞术流程
样本收集及处理 制备单细胞悬液 免疫荧光染色
上机检测 数据分析
流式细胞术检测样本
FL3 (670LP)
104
IL-8
103
IL-6
102
101
100 100 101 102 103 104 Detector Ab Intensity
FL2 (585/42BP)
BDTM CBA Kits
操作步骤
检测物与捕获微球共孵育 标记荧光探测试剂（FITC或PE标记） 洗涤 流式细胞仪检测 CBA分析软件批量数据分析
A = 1.33 B = 4.08 C =3.24 D = 4.42 R^2 = 0.9987
CBA 分析软件
Home Screen
Toolbar Calibration entry screen
BD CBA Flex Set
• 基本原理与CBA kit相似 • 检测原理不同：
Flex Set微球带有近红外和红色两种荧光，分别在 流式细胞仪的FL3（近红外荧光）和FL4（红色荧 光）通道检测，通过这个二维矩阵（对应于微球上 的特定序号）识别捕获微球，从而定性目的蛋白， PE标记的检测抗体在FL2通道来对目的蛋白定量。