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• 【实验步骤】
• 一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约 含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整 个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划 线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方 法，也可制作大肠杆菌平板备用。
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二、纸片法
取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、 链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区 域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡 笔作上记号。 将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无 抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌 效力。样例如下图：
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记录实验结果
管号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
稀释倍数
1
1/2
1/4
1/8
1/1 6
1/3 2
1/6 4
1/1 28
1/2 56
0
稀释浓度(u/ml)
128
64
32
16
8
4
2
1
0.5
－
金色葡萄球菌
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【注意事项】
1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉 签火焰烧灼后丢弃。 2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意 稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。 3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈 出现交叉。 4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对 一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上 做好记号。结果记录时将本组结果综合。
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【实验原理】
抗菌作用 耐 药 性
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【基本原理】
抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物 的能力。 两种测定方法：体外与体内（化学治疗实验）； 评价指标： （1）最低抑菌浓度（MIC）： 能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。 （2）最低杀菌浓度（MBC）： 能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。
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试管号 牛肉膏汤 （ml） 青霉素（ml） 葡萄球菌液 （ml）
1
1 1
2
1 1
3
1 1
4
1 1
5
1 1
6
1 1
7
1 1
8
1 1
9
1 弃1
10
1 0
0.5
0.5
0.5
00
0.5
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• 1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至 5×107～108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。 放入37℃培养箱内培养24h后，取出观察细菌生长 情况。 • 以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌 的最低抑制浓度（MIC）。 • 最低杀菌浓度（MBC） • 结果记录于下表：
抑菌试验方法总结
实验内容
实验一 实验二 实验三 实验四 实验五 实验六 实验七 实验八 影响药物作用的因素 药物代谢动力学实验 处方与药物的配伍禁忌 中毒与解救试验 药物对离体肠的影响 抗微生物药物的体外抑菌实验 生物碱的提取及其药敏实验 药物对离体心脏的影响
实验六、抗菌药物的体外抑菌实验
【实验目的】 掌握药敏试验的方法，了解药物对常见菌的 作用。 意义： • 体外抗菌试验对临床用药具有参考价值。 • 鉴定新药是否具有抗菌活性。
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实验结果记录：抑菌直径（mm）
药物
细菌 青霉素 （16万 u/ml） 链霉素 （1.0万 u/ml） 磺氨嘧啶钠 (1% ) 四环素 (25 %)
金葡菌
链球菌
大肠杆菌
沙门氏杆菌
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二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支，按照1至10编号，排列于 试管架上。按照无菌操作，从第一管到第10管， 分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256μ/ml的青 霉素溶液1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第 一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入 第三管，依次逐管进行稀释到第８管，第10管不 加青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药物， 不加菌液，作为药物对照组。
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【试剂与器材】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球菌、大 肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、 磺胺嘧啶钠、四环素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、 氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管 架、吸管、平皿等。 256μ/ml青霉素溶液： 药敏试纸的准备：
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【思考题】
• 分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较常见药 物对金黄色葡萄球菌的作用强度。
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Careful ,then successful !