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第 1 页 共 1 页 细胞克隆形成实验
一、
当单个细胞在体外增殖6代以上，其后代所组成的细胞群体，成为集落或克隆。

每个克隆含有50以上的细胞，大小在0.3-1.0mm 之间。

集落形成率表示细胞的独立生存能力。

各种理化因素可能导致细胞的克隆形成能力发生改变。

通过一定的实验方法可以对细胞的克隆形成能力进行检测。

[晶莱生物]
二、实验方法
平板集落形成实验、软琼脂集落形成实验
(a)平板集落形成实验：本法适用于贴壁生长的细胞和正常培养的细胞
(b)软琼脂集落形成实验：本法适用于非锚着依赖性生长的细胞，如骨髓造血干细胞、肿瘤细胞株、转化细胞系。

三、注意事项
(a)琼脂对热和酸不稳定，若反复加热，容易降解而产生毒性，且硬度下降。

因此高压灭菌后应进行分装；
(b)细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响； (c)软琼脂与细胞混合时温度不能超过40℃，否则将会烫伤/死细胞；
(d)接种时细胞密度适度，不可过高。

细胞在低密度、非贴壁状态条件下培养，生存率明显下降，永生细胞系/株克隆形成率可达到10%以上，但初代培养细胞和有限传代细胞系克隆形成率仅为0.5%-5%，甚至无法形成单个克隆。

因此，为了提高克隆形成率，有时需要在培养基中添加胰岛素、地塞米松等促克隆形成物质。

细胞接种存活率只表示接种细胞后贴壁的细胞数，但贴壁后的细胞不一定每个都能增殖和形成克隆。

而形成克隆的细胞必为贴壁和有增殖活力的细胞。

克隆形成率反映细胞群体依赖性和增殖能力两个重要性状。

由于细胞生物学性状不同，细胞克隆形成率差别也很大，一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

并且克隆形成率与接种密度有一定关系，做克隆形成率测定时，接种细胞一定要分散成单细胞悬液，直接接种在碟皿中，持续一周，随时检查，到细胞形成克隆时终止培养。

四、周期
1-2个月。