水至 1000mL），稀释至刻度，摇匀。
（2）参比波长选定：取对照液 (1)的稀释液，以 239nm为测定波长 (λ 2)，在
295nm附近（每间隔 0.2nm）选择等吸收点波长为参比波长 (λ1) ，使 Δ A=Aλ２（1）
－
A
（
λ1
1）
=
0。
（3）双波长测
六、思考题
1．双波长分光光度法是如何消除干扰的？ 2．应用双波长分光光度法应如何选择测定波长和参比波长？
一、实验目的
1．掌握双波长分光光度法的测定原理。 2．熟悉双波长分光光度法在复方制剂分析中的应用。
二、实验原理
当吸收光谱重叠的 a、b两组分共存时，若要消除 a组分的干扰测定 b组分， 可在 a组分的吸收光谱上选择两个吸收度相等的 λ1和 λ2，测定混合物的吸光度差 值。然后根据 ΔA值计算 b的含量。
品溶液（ 2）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ ΔＡ），计算，即得。
3．结果计算
被测药物标示量％＝
Au Cs D 平均片重
As
100
W 标示量
式中 ΔAu为供试液的 ΔA值，ΔAs为对照液的 ΔA值，Cs为对照液浓度（mg/mL ），
D为稀释倍数， W为取样量。
五、注意事项
1.测定之前应先检查仪器波长是否准确。 2.仔细寻找等吸收点波长 3.注意供试品溶液和对照品溶液的准确配制
对照液 (1) L
100mL
10mg TMP 对照品
乙醇
0.4%NaOH
定容 2.00ml
对照液 (2) L
（3）取对照品溶液（ 2）的稀释液，以 257nm为测定波长（ λ2），在 304nm
波长附近（每间隔 0.5nm）选择等吸收点波长为参比波长（ λ1），要求 ΔA= A λ２
（
2）
－
A
（
λ1
SMZ在257nm波长处有最大吸收， TMP在此波长吸收最小并在 304nm波长附 近有一等吸收点，故选定 257nm为 SMZ的测定波长（图 1），在 304nm波长附近 选择参比波长。
TMP 在239nm波长处有较大吸收，此波长又是 SMZ 的最小吸收峰，并在 295nm波长附近有一等吸收点，故选定 239nm为测定波长（图 2），并规定在此 波长附近选择供测定的参比波长。由于参比波长对测定影响较大，故采用对照 品溶液来确定。此波长可因仪器不同而异，测定时应仔细选择。
2）
=
0，再在 λ2与λ1两波长处分别测定供试品溶液的稀释液与对照品溶
液（ 1）的稀释液的吸收度，求出各自的吸收度差值（ ΔＡ），计算，即得。
2．甲氧苄啶的含量测定
（1）稀释液配制：取上述供试品溶液与对照品溶液 (1)、(2) 各5.00mL，分
别置于 100mL容量瓶中，各加 HCl-KCl 溶液（ 0.1mol/LHCl 75mL + 6.9gKCl ，加
图 l SMZ 紫外吸收图谱 1. TMP(0.2 μ g/ml); 2.SMZ(10.0 μ g/ml);
3. SMZ+TMP; 4. 辅料
图2 TMP 紫外吸收图谱 1. TMP(5.0 μ g/ml); 2.SMZ(25.0 μ g/ml);
3. SMZ+TMP; 4. 辅料
三、仪器与试剂
1.主要仪器：紫外 -可见分光光度计； 100mL 容量瓶 2.主要试剂：磺胺甲噁唑和甲氧苄啶对照品； 0.4%氢氧化钠溶液； 0.1mol/L 盐酸溶液；氯化钾
典型实验教学案例简介
案例 x 双波长分光光度法测定复方磺胺甲噁唑片中两组分含量
药物的含量测定是药物质量控制的重要方面。紫外分光光度法以其准确 度、灵敏度高，简便快速等特点，成为药物含量测定的重要方法。紫外法测定 含量时， 常选择被测组分的最大吸收波长最为测定波长， 以提高检测的灵敏度。 当用紫外法测定复方制剂多组分中一种组分的含量时，共存组分常常也会有吸 收干扰，此时，消除干扰就成为准确测定的关键环节。双波长分光光度法作为 计算分光光度法的一种，就是消除干扰、实现多组分含量同时测定的一种有效 手段。本实验就以复方磺胺甲噁唑片为实验对象，通过双波长分光光度法测定 其两组分的含量，从而达到学习双波长法的原理和操作的目的。
四、实验步骤
1．磺胺甲噁唑的含量测定 （ 1）平均片重测定： 10片，精密称定。 （ 2）供试品溶液配制：
片剂
研磨
精密称取片粉 (约50mg SMZ, 10mg TMP)
过滤
溶解、定容
乙醇 100m
（3）对照品溶液配制
50mg SMZ 对照品
精称 105 ℃干至恒重
100mL
乙醇
0.4%NaOH
定容 2.00ml