专题十六基因工程和细胞工程．(·深圳调研)叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。
请回答：转基因技术的核心步骤是基因表达载体的构建()限制酶和连接，完成该步骤所需要的酶有酶。
将植物体细胞处理得到原生质体，再通过()农杆菌转化法基因枪或法，将目的基因导入原生植物组织培养质体，使原生质体再生出细胞壁之后，通过技术培养可得到相应的转基因幼苗。
()来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，就此分析，原因是叶绿体与原核生物结构类似由(于叶绿体大多数基因的结构、转录与翻译系统均与原)核生物类似。
()对大多数高等植物而言，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定，其遗传方式“或不遵循”“不遵循答”)遵循(卵细胞”)传给后代，从分离定律，不会随或“花粉花粉(“”(“母本而保持了父本””)的遗传特性。
母本“或[解析] ()基因工程的核心步骤是基因表达载体的构建，所需要的酶有限制酶和连接酶；()植物细胞导入受体细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法。
原生质体再生细胞壁之后，通过植物组织培养获取幼苗；()叶绿体与原核生物结构类似。
()分离定律适用于有性生殖过程中细胞核遗传，故叶绿体转基因不遵循分离定律，为母系遗传。
．(·天津市和平区生物一模)已知某传染性疾病的病原体为病毒，该病毒表面的蛋白为主要抗原。
疫苗的生产和抗体的制备流程如图所示。
请回答下列问题：①过程代表的是()③逆转录构建基因重组载体时，启动子和终止子是重新构建的，它，过程聚合酶们应该能被受体细胞的所识别，以便于其催化转录过程。
()如图为基因的结构示意图，已知Ⅱ区的碱基数是个，其中阴影区域碱基数是个，空白区域中和的总数共有个，则由该区域能指导蛋白质合成的片段转录产生的中和总数是个。
()在给小鼠皮下注射蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的浆细胞数目。
()在将进行扩大培养前，至少需要经过次筛选，第一次是将杂交瘤细胞筛选出来，第二次是将能分泌所需抗体的杂交瘤细胞筛选出来。
()对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的蛋白来制备疫苗。
对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒与已知病毒进行核酸序列比较，或用图中的抗蛋白的单克隆抗体与分离出的病毒进行特异性检测。
[解析] ()由以上分析可知①是逆转录。
启动子是聚合酶识别和结合的位点，能启动转录过程。
()已知图中Ⅱ区的碱基数是个，其中阴影区域碱基数是个，则空白区域中碱基总数为个，又已知空白区域中和的总数为个，则＋总数为个，每条链中＋总数为个，根据碱基互补配对原则，由该区转录形成的成熟中和总数也是个。
()在给小鼠皮下注射蛋白时，要重复注射几次的目的是通过二次免疫，增加小鼠体内的浆细胞数目。
()在将进行扩大培养前，至少需要经过次筛选，第一次是用选择培养基筛选出杂交瘤细胞，第二次是采用抗体阳性检测法筛选出能够产生特异性抗体的杂交瘤细胞。
()对健康人进行该传染病免疫预防时，可选用图中基因工程生产的蛋白所制备的疫苗。
对该传染病疑似患者确诊时，可以从疑似患者体内分离出病毒，与已知病毒进行核酸序列比较；或采用抗原—抗体杂交法，即用图中的抗蛋白的单克隆抗体进行特异性结合检测。
．如图为三种质粒和一个含目的基因的片段，其中为氨苄青霉素抗性基因，为四环素抗性基因，为蓝色显色基因，Ⅰ( )、Ⅰ( )等为限制酶和其切割位点及其与复制原点之间的距离。
已知＝个碱基对，请回答下列问题：()片段为目的基因中的某一片段，则聚合酶和连接酶的作用形成的键依次是填图中数②(字)。
()图中作为目的基因运载体最理想的质粒是(填“”“”或“”)，请据图分析，其他两种质粒一般不能作为运载体的理由分别是质粒不含有标记基因；质粒在用和目的基因相同的限制酶切割时，复制原点会被破坏，使该质粒无法进行复制。
()用Ⅰ全酶切目的基因和质粒形成的重组质粒，并进行电泳观察，可出现长度分别为．和的两个片段的两个片段，或者长度分别为(和的识别位点之Ⅰ重组质粒上目的基因的插入位点与间的碱基对忽略不计)。
()将分别用限制酶Ⅰ切开的质粒溶液与目的基因溶液混合，加入连接酶后，进行大肠杆菌受体细胞导入操作，则受体细胞的类型包含(多选)。
．白色．蓝色．白色．、蓝色()动物基因工程通常以受精卵作为受体细胞的根本原因是。
．受精卵能使目的基因高效表达．受精卵可发育成动物个体．受精卵更易接受的插入．受精卵体积较大，便于导入操作[解析] ()聚合酶和连接酶的作用形成的键均为磷酸二酯键，因此都应为②。
()由题图可知，切割目的基因应用Ⅰ，但该限制酶会将质粒的复制原点破坏，使该质粒无法进行复制，而质粒不含有标记基因，因此两者都不能作为运载体。
()根据题意，质粒长度为，目的基因长度为，所以重组质粒长度为，如果出现长度为．的一个片段，则另外一个片段的长度为。
若目的基因与运载体反向连接，可形成长度分别为和的两个片段。
()将分别用限制酶Ⅰ切开的质粒溶液与目的基因溶液混合，加入连接酶后，可得到质粒自身环化形成的普通质粒、重组质粒和目的基因自身连接的环三种类型。
如果导入的是普通质粒，受体细胞的类型为(、蓝色)，如果导入的是重组质粒，受体细胞的类型为(、白色)，如果导入的是环，受体细胞的类型为(、白色)。
()动物基因工程通常选用受精卵作为受体细胞的根本原因是受精卵可发育成动物个体。
．人乳头状瘤病毒()与宫颈癌的发生密切相关，抗的单克隆抗体可以准确检测出，从而及时监控宫颈癌的发生，以下是以衣壳蛋白为抗原制备出单克隆抗体的过程，请据图回答下列问题：()。
单克隆抗体制备过程中涉及的细胞工程技术有动物细胞培养、动物细胞融合()若要分析杂交瘤细胞中染色体，可通过解离、漂洗、染色和制片等过程制成装片，然后在显微镜下观察。
杂交瘤细胞中染色体数目与普通淋巴细胞相比具有的特点是染色体数目加倍，在①②③培养基上存活的细胞可能包括(。
)填下列序号①无抗体分泌的细胞②抗抗体的分泌细胞③其他无关抗体的分泌细胞()对于抗体检测呈细胞应尽早进行克隆化，克隆化的方法最常用的是有限稀释性的杂交瘤阳法，即稀释细胞到～个，每孔加入细胞稀释液，使每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的。
()由上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体，理由是小鼠形成的抗体对人体来说是抗原，存在着排异反应。
()科学家从某些无限增殖细胞的细胞质中分离出了无限增殖调控基因()，该基因能激发动物细胞分裂，这为单克隆抗体的制备提供了更多的思路。
除本题描述的制备单克隆抗体技术外，请再简要写出一种制备单克隆抗体的思路。
通过基因工程向浆细胞中导入；利用核移植技术将浆细胞的细胞核移植到去核的无限增殖细(胞中答对其一即可)。
[解析] ()利用显微镜观察有丝分裂过程中的染色体，需先制作临时装片；杂交瘤细胞中含有浆细胞和骨髓瘤细胞的染色体，所以比普通淋巴细胞的染色体数目多一倍；在培养基上生存的细胞均为杂交细胞，这些杂交细胞中有分泌抗体的细胞，有分泌其他抗体的细胞，也有不能分泌抗体的细胞。
()抗体检验呈阳性，说明该杂交瘤细胞可产生所需抗体；为保证每个小孔不多于一个细胞，根据浓度可推断加入细胞稀释液的量：设加入细胞稀释液的最大量是，则个×＝个，＝。
()小鼠形成的抗体与人体抗体不同，故在人体内可引起免疫反应，所以上述过程生产出的单克隆抗体不能直接用于人体。
()根据所给信息可知，还可通过转基因技术或核移植技术获得既能大量增殖，又能产生特定抗体的杂交细胞。
．(·陕西西安长安一中第一次检测)下图是植物体细胞杂交过程示意图，请据图回答：()植物体细胞杂交的第①步是去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体。
目前此步骤最常用的方法是酶解法，也就是在温和的条件下用等分解植物的细胞壁。
纤维素酶、果胶酶②()过程的发生，必须进行人工诱导。
人工诱导原生质体融合常用的化学方法是用聚乙二醇试剂作为诱导剂诱导融合。
动物细胞融合还常用到作为诱导剂。
灭活的病毒与过程()③密切相关的具有单层膜结构的细胞器为高尔基体。
脱分化⑤④()过程称为，紫杉醇，过程称为——。
若利用此技术生产治疗癌症的药物再分化培养将进行到(填字母编号)即可。
()植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值，其突出的优点是可以克服远缘杂交不亲和的障碍。
[解析] ()植物体细胞杂交的第①步是用纤维素酶和果胶酶去掉细胞壁，分离出有活力的原生质体。
()人工诱导原生质体融合常用的化学方法是用聚乙二醇试剂作为诱导剂诱导融合。
动物细胞融合还常用到灭活的病毒作为诱导剂。
()过程⑧是杂种细胞生出细胞壁，高尔基体与植物细胞壁形成有关。
()④⑤过程分别为脱分化和再分化，治疗癌症的药物——紫杉醇是从紫杉细胞中提取的，只需将植物组织培养进行到愈伤组织阶段即可。
()植物体细胞杂交在育种工作中具有广泛的应用价值，其突出的优点是可以克服远缘杂交不亲和障碍，大大扩展可用于杂交的亲本组合范围。
．(·全国卷Ⅱ)某种荧光蛋白()在紫外光或蓝光激发下会发出绿色荧光，这一特性可用于检测细胞中目的基因的表达。
某科研团队将某种病毒的外壳蛋白()基因连接在基因的′末端，获得了－融合基因(简称为甲)，并将其插入质粒，构建了真核表达载体，其部分结构和酶切位点的示意图如下，图中～四种限制酶产生的黏性末端各不相同。
回答下列问题：()据图推断，该团队在将甲插入质粒时，使用了两种限制酶，这两种酶是。
使用这两种酶和进行酶切是为了保证甲的完整甲与载体正确连接。
，也是为了保证()将转入体外培养的牛皮肤细胞后，若在该细胞中观察到了绿色荧光，则说明基因在牛的皮转录和肤细胞中完成了翻译过程。
为了获得含有甲的牛，该团队需要做的工作包括：将能够产生绿色荧光细胞的()细胞核移入牛的去核卵母细胞、胚胎移植等。
中、体外培养()为了检测甲是否存在于克隆牛的不同组织细胞中，某同学用方法进行鉴定，在鉴定时应分填“”“总核别以该牛不同组织细胞中的(“作为模板。
””)核或[解析] ()由题意可知，基因和基因合成了－融合基因(简称为甲)，题图中显示了四个酶切位点，当将－融合基因插入质粒时，可用和限制酶进行酶切，用这两种酶进行酶切不会破坏甲的完整性，同时能保证甲按照正确的方向与载体连接。
()若在牛皮肤细胞中观察到了绿色荧光，则说明－融合基因得到表达，即目的基因在受体细胞中通过转录和翻译合成了荧光蛋白。
()为了获得含有甲的牛，可将含有目的基因的细胞的细胞核移入牛的去核卵母细胞中，然后进行体外培养、胚胎移植等。
()利用技术扩增目的基因，可以检测目的基因是否存在。
扩增的模板是。
．(·天津卷)甲型流感病毒为病毒，易引起流感大规模流行。