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第7章 计算分光光度法

Contents
中华人民共和国药典（2005年版） 二部附录ⅣA 紫外-可见分光光度法
1. 对照品比较法 2. 吸收系数法 3.计算分光光度法
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二部收载: Ⅰ、复方磺胺嘧啶片 （磺胺嘧啶+甲氧苄啶）
复方磺胺甲恶唑片（磺胺甲恶唑+甲氧苄啶） 双波长法(等吸收点法，对照品) Ⅱ、 维生素A及其制剂 三波长校正法 （二部附录Ⅶ J 维生素A测定法）
精密称取对乙酰氨基酸适量，
用乙醇制成浓度为5、6、7、8、9
g
mL
的溶液
在249nm和262nm处测定吸收度 A1'、A2'
A1K1'A A2'
得到浓度 c 1 与 A1的回归方程
A 10.06 c1 50.0011.0000
平均回收率99.5%，RSD=0.5%
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三波长法
（1） 计算公式： 利用三角形相似原理
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用校正公式计算；
应用三波长校正法需注意由于要在斜坡上测定吸 光度，对仪器波长精度要求较高，应按规定对仪 器校正后方可测定。
国家药典委员会. 中华人民共和国药典. 北京:化 工出版社.附录46页. 2005.
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7.3 导数光谱法
仪器微分法（光学法， 电子学法） 数值微分法 （微机信号处理法）
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中华人民共和国药典（2005年版） 中华人民共和国药典（2005年版）
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快速简便，仪器价格低廉； 适合复杂体系不经分离的测定，可用于消除各种干
扰； 不宜用于定量分析的标准方法。
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基本方法
紫外、可见吸收光谱中的吸收定律
Acl
吸光度的加和性
A 1 c 1 2 c 2 l A 1 A 2
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例7-1 氨基C酸偶氮氯膦(R)可与过渡元素 La、Sc分别形成络合物，它们的吸收光谱 如图7-5所示。试用三波长分光光度法消除 Sc的干扰。 解 待测组分La的吸收曲线上选取吸光度差 较大的B、C两点，对应于波长λ1（672.5nm） 和λ2(626.5nm)， 由此交于干扰组分Sc吸收 曲线的D和E（本例中E和B重合）。 连结此两点，并外延交于第三点F，该点对 应的波长即为λ3,由此通过作图得到λ3的初 选值（700nm）。
AII 1
)
由于
K II 2
AII
1 ，
即
KAI2I
AII 1
0 ，则有
△A=
△AI=KA
I 1
-A
I 2
=
(K
I
1
I 2
)
cIl
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系数倍率法
波长对的选择原则
1、A A1 KA 2 越大越好
2、测定波长，一般选择待测组份的最大吸收波长 处，且尽量避免在吸收曲线的陡坡处。
3、K值不宜过大，一般以小于3为宜
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复方感冒胶囊中对乙酰氨基酚的含量测定 200—300 nm范围内扫描
测 定
249nm
波
长
的 选
262nm
择
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K值的测定
精密称取马来酸氯苯那敏适量， 用乙醇配成15，20，25 g mL 的溶液
在249nm和262nm处测定吸收度 A1、A2
K A2 A1
得K为1.350
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工作曲线的绘制
2 1
A
消除了 组份对组份的测定干扰
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2 1
(I 1K
I 1
) I
2
假定 I 为待测组分，II 为干扰组分，倘若给定一个
比例系数
K，使
AII 1
KAI2I
，则有
△ A=
图7-3 系数倍率法示意图
KA2
A1
K
(
AI 2
AII 2
)
(
AI 1
AII ) 1
( KAI2
AI 1
)
(
KAII 2
AA2
nA1 mA3 mn
（2） 调节m、n， 使组分△A足够大， 干扰 △A趋于0
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根据相似三角形原理有
RM1 ~RQ2
因为 x(A 3 22)x(M 3 11)Ax3 RN3 ~RM1
则有
A2 A3 M1A3
32
31
从图可知 AA1 M1
所以 AA 1(31)A 3 2 (212)A 3
λ（nm） 672.5 626.5 700.0
701.0
702.0
Sc2O3(μg)
A 1
A
A
2
3
△A A 3
△A A 3
△A
10.0 0.226 0.358 0.163 -0.009 0.155 -0.006 0.147 -0.002
15.0 0.345 0.545 0.234 -0.005 0.222 0.222 0.210 0.005
优点: 不经分离直接测定多组分； 简便 局限性: 重现性差
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药典二部附录ⅥA规定（2000）
采用计算分光光度法应慎重。本法有多种，使用时均应按 照各品种项下规定的方法进行。 当吸收度在吸收曲线的陡然上升或下降的部位测定时，波 长的微小变化可能对测定结果造成显著影响，故对对照品 和供试品测试条件应尽可能一致。 若测定时不用对照品，则应在测定时对仪器作仔细的校正 和检定。
图7-2 一波长固定、一波长扫描法选择波长组合
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系数倍率法
二组份混合体系的测定
若给定一个比例常数K，使
AA1 KA2
KAⅡ 2
AⅡ 1 ，则有
A
A 1 K 2 A A 1 K 2 A
K=1时，即为等吸收点法
其中 则
A 1
A 2
K,
若 A 0
A A 1 K 2c l
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维生素A及其制剂含量测定的三波长校正法
本法由莫顿·斯塔布斯(Morton Stubbs)提出,目前主 要用于维生素A及其制剂的测定,也有人将其用于某 些激素类药物制剂的含量测定。
由于维生素A制剂中含有稀释用油和维生素A原料 药中混有其他杂质，所测得的吸光度不是维生素A 独有的吸收。
中国药典附录ⅦJ规定了维生素A测定法使用三波长 校正法校正非维生素A物质的无关吸收所引入的误 差。
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图7-1 图解法选择波长组合
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常首选待测组分的最大吸 收 波 长 作 为 测 定 波 长 λ1 ， 因 而 这里将苯酚的最大吸收波长 270nm选做λ1，在这一波长位置 作一垂直于x轴的直线，交于共 存组分吸收曲线上的一点，在 从这一点，画一平行于x轴的直 线，在共存组分的吸收曲线上 便有一个或几个交点，此交点 的波长作为参比波长λ2。
两类: 1. 消除共存组分 双波长等吸收点法 双波长系数倍率法 三波长法 导数分光光度法
2. 并行计算方法
线性方程组、最小二乘法、卡尔曼滤波法
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一、双波长计算分光光度法
根据朗伯-比尔定律，待测溶液在不同的两个波长下 ，存在以下关系：
A A 1 A 2 1 2cl
定量分析的依据
Ac