酶为2500个单位和ห้องสมุดไป่ตู้1mg糜蛋白酶为1000单
位，折算成重量，则糜蛋白酶的限度为5%
（g/g）。
1:1000=x:50 x=0.05（mg）
L=0.05/1=5%
2. 生产过程中杂质的检查
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（三）安全性试验
热源试验 异常毒性试验 :急性毒性物质 过敏试验：异性蛋白 降压物质试验：导致血压降低的杂质、组
电泳法
等电聚焦法
生物鉴别法：家兔惊厥试验
12
（一）理化鉴别法
1.化学鉴别法： 药 物 + 试 剂
颜 色 现 象
沉 淀
例：溶菌酶 - CONH- +Cu2+ 络合显 色
13
2.紫外分光光度法
溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml
判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。
3
1．生化药物：
动 物
提 取
生 命 基 本 物 质 及
植 物 微 生 物
生 物 -化 学 半 合 成 现 代 生 物 技 术
衍 生 物 降 解 物 大 分 子 的 结 构 修 饰 物
例：氨基酸、多肽、蛋白质、酶等。
4
2. 基因工程药物：
以DNA重组技术生产的蛋白质、多肽、 酶、激素、疫苗、单克隆抗体和细胞生长 因子类药物。
人生长激素释放抑制因子、人胰岛素、
人生长激素
2）细胞因子类药物：
人干扰素人白细胞介素、集落刺激因
子、促红细胞生成素
3）酶类及凝血因子类药物
8
三、特点
1. 生物体的基本生化成分 2. 分子量大: 分子量测定 3. 结构难确证 4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、
最终产品 5. 生物活性检查
9
6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定：
3. HPLC法：
利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留
时间和肽图谱的一致性进行鉴别。
14
4.酶法：
例：尿激酶的鉴别---气泡上升法
原理：
尿激酶
牛纤维蛋白溶酶原
牛凝血酶
牛纤维蛋白原
蛋白结块
结块溶解：气泡上升
15
方法：
取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维
蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、
理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分
的生物活性
返 回 10
第二节 质量检验的基本程序与方法
生化药物和基因药物质量控制的项目：
来源与种类
纯度
性状
干燥失重或水分
鉴别
炽灼残渣
氨酸组分分析 生物活性
肽图
热源试验
糖含量
含量分析
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一、鉴别
理化鉴别法：化学鉴别法
紫外分光光度法
HPLC法
生化鉴别法：酶法
1．电化学分析法
药物膜电极
生物组织膜电极
药物电极 微生物电极
离子选择性电极法
免疫电极
免疫场效应管
酶电极
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2. HPLC法
1）RP-HPLC：柱前衍生化自动测定氨基酸 柱：RP—18， 柱温：48℃ 流动相：A--0.05% TFA；B--乙腈-异丙醇（4：1） 梯度洗脱 荧光检测器：ex=280nm～340nm,em=430nm
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含量测定方法：
理化分析法：
化学分析法：重量测定法、滴定分析法
电化学分析法
光谱分析法：比色法、紫外分光、荧光分光光法
色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、
HPGFC、
灌注色谱法、HPCE法
酶法：酶活力测定法、酶分析法
电泳法
生物检定法
返 回 24
第三节 常用定量分析方法及其应用
第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概念
• 基本要求 • 概述 • 质量检验的基本程
序与方法 • 常用定量分析方法
及其应用 • 练习与思考
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基本要求
1．掌握本类药物质量检验的基本程序与 方法类型。
2．掌握HPLC法和酶活力测定法在本类 药物测定中的应用。
3．熟悉本类药物的范围、种类、质量控 制的要点。
5
DNA重组技术（基因工程）：生产过程为
天然基因
重组
内切酶 载
的遗
合成的核 连接酶 体
传物
转
苷酸序列
质
移
目的 分离纯化 宿主
到
产物
细胞
增殖、表达
6
二、种类
氨基酸、多肽与蛋白质类
酶类与辅酶类
1．生化药物 多糖类
脂质类 核酸及其降解物和衍生物 类药物
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2．基因工程药物的种类
1）激素类及神经递质类药物：
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测定：
样品---肽
样品水解：5.7mol/L盐酸，0.1%苯酚、通
N2，
110℃，20h ～24h。
样品干燥：真空
样品的衍生化：丹酰氯
水解剩余的衍生化试剂：0.4mol/L NaOH
进样测定
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N(C3H )2
SO2Cl
+ R-N2H
N(C3H )2 SO2NHR
胺、类组胺
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无菌试验：活菌 基因工程药物中可能杂质与污染物检查
来源于宿主细胞的残留DNA，外源性杂质 致突变试验 生殖毒性试验
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（四）含量测定
生化药物和基因药物的含量表示方法： 百分含量：适用于结构明确的小分子药
物或经水解后变成小分子的 药物。 生物效价或酶活力单位：适用于酶类、
蛋白质类药物。
O
OS3O -
HNS3- O
与国家肝素标准品对照，其移动位置相应。
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6. 生物法：
利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。
利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂 量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注 50%GS，惊厥停止。
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（二）杂质检查
一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析
生产过程中杂质的检查
1. 原料药纯度分析：
多糖类-----低聚糖、核酸、蛋白质 酶类药物-----酶催化反应基本产物的分析，
具有一定活性的其他有关酶的检查。
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例：胰蛋白酶中糜蛋白酶的检查
选用N-乙酰-L-酪氨酸乙酯作底物进行糜蛋白
酶的限度检查。糜蛋白酶的限度为2500个胰蛋
白酶单位中不得大于50单位，按每1mg胰蛋白
4．了解本类药物含量测定的其他方法。
返 回2
第一节 概 述
一、防病、治 病的三大药源
药物
化学药物 生物药物
生化药物 生物技术药物
biopharmaceutics or biopharmaceuticals
生物制品 中药
biochemical drugs
biotechnology drugs
biological products
牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃
恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内
凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块
溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以
0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小
时内不溶。
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5. 电泳法：以肝素鉴别为例。
O CO-O
CH 2OS3O O
O O OH