2014/5/9
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3.2 标本运送
注1：若送检标本超过2h ，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植 菌过度生长。

为防止口咽部正常菌群的过度生长，可将标本放置2℃～8℃环境，但 培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。

注2：若标本延迟送检超过2h 后未冷藏（超过2h ～24h ，2℃～8℃），应在报告中说明因 延误送检标本，可能对培养结果造成的影响。

3.3 筛选并拒收下呼吸道细菌培养标本
❝拒收24h 内重复采集的痰细菌培养标本 ❝
唾液
❝鼻冲洗液和分泌物、鼻孔拭子 ❝咽部标本
❝未经保护套管收集的支气管刷培养标本 ❝痰的厌氧菌培养标本
注：除支气管穿刺吸出物、PSB 、活检标本、胸水或其他未经污染以外的标本做厌氧菌培养均不合格。

❝诱导痰
注：诱导痰标本只适用于检测卡氏肺孢子菌和结核分枝杆菌，对其他病原菌检出效果差。

4.1 痰及气管吸出物标本处理 4.1.1
标本处理要求
❝接种标本及涂片操作必须在Ⅱ级生物安全柜中进行；
❝
应尽快处理所有标本，特别是来自急诊、新入院患者和有创方法采集的标本（如：BAL 和肺活检标本），以保证致病菌的活性，避免造成重复采集标本；
❝
使用全自动接种前处理系统的实验室按厂家说明书处理标本，洗痰、液化后自动接种和涂片革兰染色。

4.1.2 接种标本 4.1.3 培养
4.1.4 标本涂片及革兰染色
注1：革兰染色脱色时间因选用不同的脱色剂而异。

1）95%乙醇脱色时间为30s ；2）丙酮- 乙醇（体积比为3:7,棕色瓶室温保存，有效期1年）脱色时间1s ～5s ，脱色效果一致性 好；3）丙酮（试剂纯）脱色时间最短，当标本中含大量宿主细胞时脱色效果好。

注2：使用革兰染色仪染色的实验室按照厂家操作说明书进行，注意条件优化，使涂片染色结果达到满意效果。

4.1.5显微镜观察革兰染色结果
注：低倍镜下细胞计数、油镜下细菌计数半定量指标；
❝
4.2 气管镜标本处理
4.2.1 支气管肺泡灌洗液定量培养 4.2.2 保护毛刷定量培养
4.2.3 接种其他培养基并培养 4.2.4 革兰染色标本处理
4.2.5 剩余BAL 标本可用于其他病原检测（标本珍贵）
对剩余BAL 标本离心后，可根据需要进行病毒、分枝杆菌、军团菌和真菌培养；或做病毒、卡氏肺孢子菌、抗酸染色和真菌涂片染色（见参考文献4的第六篇相关章节）（修改解释）。

4.3 连续培养并观察慢生长菌
4.4 分离并鉴定下呼吸道重要致病菌（参见附录C ）
“常见可疑菌落形态及经典快速鉴定方法(16种)”（修改解释）
4.4.1链球菌属
4.4.2苛养革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上难生长） 4.4.3革兰阴性双球菌
4.4.4革兰阴性杆菌（在麦康凯平板上生长良好） 4.4.5葡萄球菌属 4.4.6肠球菌属 4.4.7革兰阳性杆菌 4.4.8鉴定丝状真菌
4.4.9涂片时可见但培养不生长的细菌
4.5质量控制
4.5.1革兰染色 4.5.2抗酸染色 4.5.3培养基 4.5.4试剂
4.5.4.1每批号、每周需做质控的试剂
4.5.4.2每批号、每次试验需做质控的试剂。