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紫外可见分光光度法实验

1.1 了解紫外可见分光光度计的食用方法及基本结构
1.2 掌握用紫外可见分光光光度法进行定性分析和定量分析的方法
2.实验原理
2.1 定性分析
不同物质的分子结构不同,因此各种物质各有其特征的紫外可见光吸收光谱。

以波长为横坐标,吸光度为纵坐标作图,得到的曲线称为吸收光谱曲线,他能清楚的描述该物质对不同波长光的吸收情况。

光吸收程度最大处叫做最大吸收波长,用λmax表示。

浓度不同时,光吸收曲线的形状相同,最大吸收波长不变,只是相应的吸光度大小不同。

说明吸收曲线的形状只与物质的本性有关,而与物质的浓度无关。

因此,我们可以利用吸收曲线对物质进行定性分析。

2.2 定量分析
根据朗伯-比尔定律:A=εbc,式中A—吸光度,ε—摩尔吸光系数,b—液层厚度cm,c—浓度,mol/L
当液层厚度b固定时,吸光度正比于浓度,因此可采用标准曲线法对物质进行定量分析。

通常选择最大吸收波长进行定量分析,以提高分析灵敏度和消除干扰影响。

3.仪器及试剂
3.1 仪器及配件
UV1800PC型紫外可见分光光度计,1cm石英比色池
3.2 试剂
3.2.1 虾青素标准溶液
3.2.1.1 标准储备液(浓度为1.0mg/mL)
称取10mg 虾青素标准品溶于二甲基亚砜(DMSO),定容至10mL,摇匀,避光-20℃保存。

3.2.1.2 标准系列溶液的配制
用移液管分别量取0.5,1.0,2.0,3.0mL标准储备液,分别用50mL容量瓶定容,稀释溶剂为无水乙醇,定容之后摇匀,避光放置。

3.2.2 未知浓度的虾青素样品溶液。

4.实验内容
4.1 不同浓度的虾青素溶液吸收曲线的比较。

4.2 标准曲线的制作。

4.3 样品溶液的测定。

5.仪器操作步骤
5.1 开机,自检,预热20分钟
5.2 放置样品
将配好的样品转入比色池,比色池要用蒸馏水和待测溶液润洗,溶液装至比色池的1/2~2/3左右。

装好后用纸巾吸干比色池表面的液体,将比色池放入样品槽中,注意比色池透光面要对住样品槽有孔的一边。

5.3 全波长扫描
将不同浓度的标准品依次转入比色池中进行全波长扫描,比较其吸收曲线和最大吸收峰
5.4 制作标准曲线
取不同浓度的标准品最大吸收波长处的吸光值绘制标曲。

5.5 样品浓度的测定
6.注意事项
6.1 拿比色池要拿毛玻璃面,放置比色池要使毛玻璃面向下,以免影响透光面的透光性。

6.2 比色皿按材质分为几种,使用时需根据样品的性质选择不同材质的,石英比色池价格昂贵,要小心使用。

7.实验报告内容:
1)目的
2)原理
3)简单操作步骤
4)实验结果(全波长扫描图、标准曲线、样品浓度的计算,定性定量依据)
5)注意事项(就自己的学习和体会写几点)。

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