第三章植物离体快速无性繁殖技术和脱毒培养技术
第一节、植物离体快速繁殖技术
一、植物离体快速无性繁殖的概念及其意义
1 概念
离体无性繁殖：指利用组织培养的方法进行植物离体培养，在短时间内获得大量遗传性一致的个体的方法，又称“离体繁殖，快速无性繁殖、微型繁殖”。

试管苗：由离体无性繁殖获得的植株称试管苗。

无性系：指有同一个体通过无性繁殖产生的一个群体，它们的遗传背景基本一致。

2 应用
（1）用来加速难繁殖和繁殖速度慢的植物的繁殖。

（2）无病毒苗木的繁殖。

（3）用于某些杂合园艺植物的繁殖。

（4）用于需要加速繁殖的特殊基因型。

二、植物离体快速无性繁殖的特点
1 优点
（1）首先体现在一个“快”字上。

（2）可人为控制条件，不受大自然的干扰
（3）快速培养脱毒苗。

2局限性
（1）一些植物快速无性繁殖技术的某些环节还没有突破。

（2）要对其成本、技术等进行估算。

（3）随继代次数增多，培养材料的分化能力下降。

三、离体无性繁殖中器官的发生形式
1 不定芽型
２器官型
３器官发生型
４类胚体发生型
５原球茎型
四、离体无性繁殖的程序
•无菌母株的制备
•茎芽的增殖
•诱导生根
•炼苗
•再生植株的鉴定
五、植物组织培养中应注意的问题
１褐变
（１）褐变
褐变：指在组织培养过程中，由培养材料向培养基中释放褐色物质，致使培养基逐渐变成褐色，培养材料也随之慢慢变褐而死亡的现象。

（２）克服褐变的方法
选择适宜的外植体（幼嫩材料、春季取材）
改善营养条件（连续培养）
在培养基中加入一些附加物
２污染
（１）特点：
细菌污染的特点
在培养材料附近出现黏液状菌斑，一般接种1-2天一5可发现。

特别应注意一种呈乳白色的细菌污染，这种细菌为芽孢杆菌，外被荚膜，耐高温，一般灭菌剂难以杀死，可随培养材料、用具传播，可出现在培养基表面，也可呈滴形云雾状存在于培养基内，发现及时淘汰，并对用过的器具严格高温灭菌。

真菌污染的特点
培养基上长霉，一般接种3-5天就可先，霉的颜色有黑、白、黄等，真菌污染的特点是污染部分有不同颜色的霉菌，接种3天，有时多达10天才能表现。

（２）克服方法：
•外植体灭菌不彻底
•培养基及各种器具清洁灭菌不彻底
•人为因素
•超净工作区被污染
•环境不清洁
３玻璃化
（１）玻璃化
玻璃化：是试管苗的一种生理失调症状，当植物材料进行离体繁殖时，有些培养物的茎、叶往往会出现半透明状和水渍状，这种现象称为玻璃化。

（２）克服方法
•增加固体琼脂浓度，使细胞吸水受到阻碍。

•提高培养基中的Ｃ、Ｎ比。

•控制温度，增加自然光照。

•附加一些物质
第二节、植物的脱毒技术
一、病毒的特性及其侵染
１病毒的特性
２植物病毒的侵染途径
３病毒在植物体内分布不均匀的原因
（１）分生组织中无微管系统，病毒不易移动。

（２）在旺盛分裂的分生细胞中，代谢活性很强，有竞争状态，抑制了病毒的复制。

（３）在分生组织中存在高水平的内源激素，可以抑制病毒的增殖。

二、脱毒的方法
１物理方法
（１）射线（Ｘ射线、紫外线等）
（２）热处理
２化学方法
嘧啶、嘌呤类似物、抗生素等３生物学方法
（1）茎尖脱毒
茎尖脱毒的原理：病毒的传播：微管系统和细胞的胞间连丝传播，以微管组织为主。

茎尖脱毒的技术关键：
•同一种病毒在植物体内分布部位不同。

•不同种类病毒在同一植物中分布位置不同。

•茎尖越小，对培养基要求越高，成功率低。

•茎尖越小，剥离技术要求高。

（2）愈伤组织脱毒
（3）微体嫁接脱毒
原理：把极小的茎尖〈0.2mm作为接穗嫁接到砧木上，然后连同砧木一起在培养基上培养，由砧木吸收培养基中的营养，接穗在砧木的哺育下很容易成活。

技术关键
•微体嫁接要求剥离技术高。

•筛选培养基时要考虑到砧木与接穗对培养基营养组成的不同要求。

•取材季节，春季容易成功，嫁接率高。

（4）珠心组织脱毒
珠心胚与微管组织无关
三、茎尖培养脱除病毒的程序
１取材和灭菌
（１）材料的大小
（２）取材时间
（３）优良种质
（４）生长健壮
（５）年龄
２茎尖剥离
（１）防止茎尖被损伤。

（２）注意保湿
（３）避免污染
3.初代培养
注意GA的应用
4.分化培养
可以先诱导愈伤组织，然后在诱导分化形成苗。

茎尖培养可以与热处理和化学脱毒相结合。

5无病毒植株的鉴定
（１）血清鉴定法
（２）生物学鉴定法
（３）电子显微镜检查法
6无病毒种苗的保存与利用
保存：隔离种植保存
离体保存
利用：建立良种繁育场。