接触抑制：贴壁细胞分裂生长到表面相互接 触时，细胞就会停止分裂增殖。
传代培养：将贴满瓶壁的原代细胞重新用胰 蛋白酶处理，分装到两个或两个 以上的培养瓶中继续培养，称为 传代培养。
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养
1.2 培养过程
胚胎或幼龄动物的 组织器官
传代培养
剪碎
用胰蛋白酶处理 分散成单个细胞
电刺激使 两个细胞 融合构建 重组细胞
克隆牛
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
2.动物体细胞核移植和克隆动物
（1）概念：将一个动物的细胞核，移入一个已经去掉细胞 核的卵母细胞中，使其重组发育成新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体。
（2）结果：克隆动物
（3）原理：动物细胞核的全能性
（4）种类：
（4）种类：
细胞分化程度低，恢复全能性容易
细胞分化程度高，恢复全能性不容易
（5）过程：
从卵巢中取 卵母细胞， 体外培养至 MⅡ期
将供体细 胞整个注 入去核的 卵母细胞 中
此时细胞 核靠近第 一极体。 最外层是 透明带
用物理或化学方法 激活受体细胞促进 其分裂和发育
形成的早期胚胎移 植到第三只（代孕） 母牛子宫内
4、无限细胞系细胞与原代细胞相比，不再具有单层、贴壁 和接触抑制现象。这些细胞带有癌变细胞的特点。
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养
1.2 培养过程
胚胎或幼龄动物的 组织器官
传代培养
剪碎
用胰蛋白酶处理 分散成单个细胞官 胰蛋白酶
分散成单个细胞
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养
1.4 应用
植物组织培养和动物细胞培养的比较
比较项目 原理
培养基性质 培养基特有成分
培养目的
植物组织培养
细胞的全能性 固体培养基
蔗糖 植物激素 快速繁殖、培育 无病毒植株
动物细胞培养
细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清
获得细胞或 细胞分泌蛋白
原代培养
细胞悬液
关于原代培养，注意：
1、原代培养中的“代”并非细胞的“代” 数，因为培养过程中细胞经多次分裂已经产生 多代子细胞。
2、原代培养的细胞具有单层（成单层排 列）、贴壁（紧贴瓶壁生长）、接触抑制（单 细胞沿瓶壁生长汇合时生长即停止）等特点。
关于传代培养，注意：
1、需要传代培养的原因：一是细胞之间相互接触而发生接 触性抑制；二是因营养不足和代谢物积累而不利于生长或发 生中毒。
2、传代代数与细胞增殖代数不是同一概念。在细胞培养时， 所说的“第10代细胞”，仅指该细胞已经传代10次。细胞传 一代后，一般能增殖3～6次，经过潜伏期、指数生长期和平 台期。当细胞达到平台期时，就需要进行传代培养，否则细 胞会中毒，发生形态改变，甚至死亡。
3、传至10-50代左右时，增殖变缓慢乃至停止，少数细胞 的细胞核型发生改变，获得不死性（癌性）。这些能够无限 传代的细胞，称为细胞系。
用胰蛋白酶处理 分散成单个细胞
能否用胃蛋白酶？会不会把细细胞悬液
胞整个消化掉？
原代培养
原代培养：动物组织“消化”后的初次培养。
动物细胞的贴壁生长
原代培养：动物组织消化后的初次培养。
细胞贴壁：培养帖附性细胞时，悬液中分散 的细胞很快就贴附在瓶壁上。
原代培养：动物组织消化后的初次培养。
细胞贴壁：培养帖附性细胞时，悬液中分散 的细胞很快就贴附在瓶壁上。
如何培养动物细胞?
2.2.1 动物细动胞物的幼培分龄养化动和程物度组核低织移，细胞植增比殖技老能术龄
1.动物细胞培养力强，有丝分裂旺盛，更容易
培养。 1.2 培养过程
动物组织细胞间隙中含有一定 量的弹性纤维等蛋白质，将细 胚胎胞或幼网龄络动起物来的形成具有剪一碎定弹性 和组织韧器性官的组织和器官。
细胞分化程度低，恢复全能性容易
细胞分化程度高，恢复全能性不容易
（5）过程： （6）应用： 繁育优良畜群、挽救濒危动物、克隆人体器官 （7）问题：
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
2.动物体细胞核移植和克隆动物
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
2.动物体细胞核移植和克隆动物
（1）概念：将一个动物的细胞核，移入一个已经去掉细胞 核的卵母细胞中，使其重组发育成新的胚胎， 这个新的胚胎最终发育为动物个体。
（2）结果：克隆动物
（3）原理：动物细胞核的全能性
细胞悬液 加培养液
原代培养 （分装前）
10代以内，保持 正常二倍体核型
传代培养
10代以内细胞 50代细胞
无限传代细胞
细胞增殖缓 慢，核型可 能发生变化
细胞系
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养
1.3 培养条件
无菌、无毒环境 营养：糖、氨基酸、促生 长因子、无机盐、微量元素、 动物血清等。 温度和PH：36.5±0.5℃， PH为7.2-7.4为宜。 气体环境：O2和CO2 ，CO2 可以维持培养液pH。放入 CO2 箱中培养。
专题二 细胞工程
动物细胞工程（1）
细胞工程的基本技术
植物细胞工程
动物细胞工程
植物组织培养技术 动物细胞培养技术（基础） 植物体细胞杂交技术 动物细胞融合技术
单克隆抗体技术 细胞核移植技术
2.2.1 动物细胞培养和核移植技术
1.动物细胞培养
1.1概念 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个
细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长 和增殖。